课题基金 / 基金详情

In-cell NMRによる真核細胞内蛋白質の立体構造解析法の開発

In-cell NMRによる真核細胞内蛋白質の立体構造解析法の開発
开发使用细胞内 NMR 进行真核蛋白质 3D 结构分析的方法
批准号：
21200044
负责人：
伊藤 隆
金额：
$19.39万
依托单位：
Tokyo Metropolitan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research a proposed research project)
财政年份：
2009
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2009 至 2011
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21200044/
关键词：
in-cell NMR蛋白質高次構造真核細胞ヒト培養細胞分裂酵母培養昆虫細胞アフリカツメカエル卵細胞アフリカツメカエル卵母細胞

项目摘要

项目成果

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翻译
最近,細胞内のMolecular Crowdingが蛋白質動態に及ぼす影響が議論され始めており,蛋白質の機能を理解するためには,生細胞中での詳細な「その場観察」が必須であると考えられるようになって来た.その手段としてin-cell NMRが注目されている.本研究では,進化しつつあるin-cell NMR測定技術の次の大きな目標として,「真核細胞」における蛋白質の立体構造解析を可能にする方法論的研究・開発を行う.蛋白質が実際に機能している場である生きた真核細胞における世界初の蛋白質分子の立体構造決定を目指し,in-cell NMRを用いた新しい解析手法の開発研究を行うことを目的とする.H22年度の研究実績は以下の通りである.分裂酵母のin-cell NMRについては,分裂酵母内在の蛋白質Hsp9について,予備的なin-cell NMR測定とin vivoでのNMR解析を行った.培養昆虫細胞Sf9のin-cell NMRについては,連鎖球菌protein G B1ドメイン(GB1)と高度好熱菌TTHA1718の発現系を作成し,Sf9における良好な蛋白質発現を達成した.このうちGB1については,in-cell NMRを用いて良好な^1H-^<15>N HSQCスペクトルを得ることに成功した.真核細胞内で発現させた蛋白質のin-cell NMR測定例としては世界初となる.HeLa細胞の系では,TTHA1718を用いて,細胞内蛋白質の詳細な解析のために必要な3D triple- resonance NMR測定のための予備的なin-cell NMR測定を行い,良好な結果を得た.
英文摘要
最近,細胞内のMolecular Crowdingが蛋白質動態に及ぼす影響が議論され始めており,蛋白質の機能を理解するためには,生細胞中での詳細な「その場観察」が必須であると考えられるようになって来た.その手段としてin-cell NMRが注目されている.本研究では,進化しつつあるin-cell NMR測定技術の次の大きな目標として,「真核細胞」における蛋白質の立体構造解析を可能にする方法論的研究・開発を行う.蛋白質が実際に機能している場である生きた真核細胞における世界初の蛋白質分子の立体構造決定を目指し,in-cell NMRを用いた新しい解析手法の開発研究を行うことを目的とする.H22年度の研究実績は以下の通りである.分裂酵母のin-cell NMRについては,分裂酵母内在の蛋白質Hsp9について,予備的なin-cell NMR測定とin vivoでのNMR解析を行った.培養昆虫細胞Sf9のin-cell NMRについては,連鎖球菌protein G B1ドメイン(GB1)と高度好熱菌TTHA1718の発現系を作成し,Sf9における良好な蛋白質発現を達成した.このうちGB1については,in-cell NMRを用いて良好な^1H-^<15>N HSQCスペクトルを得ることに成功した.真核細胞内で発現させた蛋白質のin-cell NMR測定例としては世界初となる.HeLa細胞の系では,TTHA1718を用いて,細胞内蛋白質の詳細な解析のために必要な3D triple- resonance NMR測定のための予備的なin-cell NMR測定を行い,良好な結果を得た.
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科研奖励(0)
会议论文
In-cell NMR studies of protein structure and dynamics inside living cells
活细胞内蛋白质结构和动力学的细胞内核磁共振研究
DOI： --
发表时间： 2010
期刊：
影响因子： --
作者： [中井陽一, 日高宏, 渡部直樹, 小島隆夫, 水野真木子, 伊藤隆]
通讯作者： 伊藤隆
NMR protein structure determination in living E. coli cells using nonlinear sampling
DOI： 10.1038/nprot.2010.69
发表时间： 2010-01-01
期刊： NATURE PROTOCOLS
影响因子： 14.8
作者： [Ikeya, Teppei, Sasaki, Atsuko, Ito, Yutaka]
通讯作者： Ito, Yutaka
Structure and dynamics of proteins at work inside cells
细胞内工作蛋白质的结构和动力学
DOI： --
发表时间： 2010
期刊：
影响因子： --
作者： [伊藤隆]
通讯作者： 伊藤隆
非線形サンプリングによる迅速な多次元NMR測定法
使用非线性采样的快速多维核磁共振测量方法
DOI： --
发表时间： 2010
期刊：
影响因子： --
作者： [伊藤隆]
通讯作者： 伊藤隆
共 10 条
    金属の溶解析出反応を制御する有機物添加剤の超高感度ラマン分光学解析
    • 批准号：
      23K23441
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $2.66万
    • 财政年份：
      2024
    • 负责人：
      伊藤 隆
    • 依托单位：
      Tohoku University
    In situ SERS spectroscopy for organic additives with controlling metal deposition
    • 批准号：
      22H02173
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $11.32万
    • 财政年份：
      2022
    • 负责人：
      伊藤 隆
    • 依托单位：
      Tohoku University
    In-situ structural biology by NMR spectroscopy
    • 批准号：
      21H02419
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $11.23万
    • 财政年份：
      2021
    • 负责人：
      伊藤 隆
    • 依托单位：
      Tokyo Metropolitan University
    解析困難な蛋白質の高精度立体構造決定法の開発
    • 批准号：
      22510237
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
    • 资助金额：
      $2.33万
    • 财政年份：
      2010
    • 负责人：
      伊藤 隆
    • 依托单位：
      Tokyo Metropolitan University
    海外基金