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ホヤの原始的な中枢神経系発生過程における細胞単位の遺伝子発現プロファイル解析-脳発生機構の進化を解析する端緒として-

海鞘原始中枢神经系统发育过程中细胞基因表达谱分析 - 作为分析大脑发育机制进化的起点 -

基本信息

批准号：
13202002
负责人：
山本博章
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

原索動物ホヤのオタマジャクシ幼生中枢神経系および脳胞内感覚器を形成する細胞全てについて、細胞ごとのcDNAライブラリーを作製し、その網羅的な発現プロファイルを作製すること、さらにそこにいたる発生段階の異なる胚においても当該プロファイルを作製し、空間的また時間軸に沿った発生プログラム解析を可能にすることを、本研究は大きな目標としている。端緒として、オタマジャクシ幼生の脳内に分化するotolith(平行器)とocellus(眼点)を構祓する2つの色素細胞それぞれを、その色素を目印にして分離し、そこからGDNAライブラリーを作成しその解析を行うことにした。すでに作製していた当該ライブラリーのクオリティーが、配列解析に満足のいく結果を示さなかったため、再度方法を変えて調製したところ、平行器および眼点色素細胞からそれぞれ2.57×10^8,4.52×10^6のcomplexityを持つcDNAライブラリーが得られた。それぞれから現在のところ約2000のファージクローンをピックアップし、そのインサートをサブクローニング後、配列決定を行らた。これらのライブラリーは、生体の特定の1細胞における遺伝子発現プロファイル解析を可能とすることがもっとも大きな特徴である。解析数がまだ十分ではないものの、これまでのところこれらのライブラリーは、、個体や組織全体に由来するライブラリーに比べて、ハウスキーピング遺伝子を含む割合が少なく、重複して出現する配列が少ない等々、特徴あるプロファイルが明らかになってきた。解析されたクローンの一部については、in situ hybridization法によってその発現領域を解析した。その結果、上記二つの色素細胞以外にも脳胞全体で発現するもの、幼生前側で特殊な発現をするもの等々興味ある結果が得られた。

Protozoa ホヤのオタマジャクシThe juvenile central nervous system および脳 intracellular sensory organ をformation するcell whole てについて、Cell ごとのcDNAライブラリーをproduced し, その内的な発现プロファイルをproduced すること, さらにそこにいたる発生stepsのdifferentなるEmbryoにおいてもwhen the プロファイルをproducedし、spaceまThe analysis of the time axis is possible, and the target of this study is large. Duanxu として, オタマジャクシ小生の脳内にdifferentiation するotolith(parallel device)とocellus(eyespot)をstructure祓する2つのChromatophore cells are separated, pigment cells are separated, and GDNA is separated and analyzed.すでにproduced by していたshould be the ライブラリーのクオリティーが, arrangement analysis に満The result of the foot is the same as the result, the method is the same again, the method is the same as the したところ, and the flat Line deviceおよびeyespot pigment cellからそれぞれ2.57×10^8,4.52×10^6のcomplexityをholdつcDNAライブラリーが gotられた. It's about 2000 now After the ップし, そのインサートをサブクローニング, the arrangement is determined by the を行らた.これらのライブラリーは、The specific 1 cell of the living body における缝子発appearsとすることがもっとも大きな特徴である. Analytical Numbersイブラリーは, individual and organization as a whole, origin of するライブラリーに比べて. Arranged with a small number of ない, etc., and a special 徴あるプロファイルが明らかになってきた. ANALYSIS されたクローンの一については、 in situ hybridization method によってその発existing field をanalytic した.その results, the above mentioned two つの pigment cells are all で発 appear するもの, the larval front side で special な発 appear をするもの, etc. 々色ある出が GET られた.