新しいcDNA発現ベクタ-を用いた遺伝病における欠損遺伝子のクロ-ニング

使用新的 cDNA 表达载体克隆遗传疾病中的缺陷基因

• 批准号: 02808037
• 负责人: 早川 浩
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02808037/
• 关键词: クロ-ニング; 発現ベクタ-; cDNA; 遺伝病; DNA修復

1色素性乾皮症F群遺伝子のクロ-ニングヒト末梢血細胞ならびに各種ヒト由来細胞から作成したcDNAライブラリ-をSV40ウイルスでトランスフォ-ムされた色素性乾皮症F群細胞,XP2YO(SV)にエレクトロポレ-ションで導入しライブラリ-上の選択マ-カ-であるハイグロマイシン耐性遺伝子を用いcDNAライブラリ-を十分にカバ-する多数のトランスフォ-マントを分離した。さらにこれらの細胞に紫外線照射を繰り返し紫外線に抵抗性の12系統を得た。これらの細胞は対照区でそのような2重耐性株が現われていないことから復帰突然変異株である可能性は低いと期待できる。これらの細胞の多くはXP2YO(SV)とHeLa S3細胞のほぼ中間の紫外線感受性を示し、それらの細胞中には複数個のcDNAを有していることが明かとなった。現在PCRにより増幅されたこれらcDNAを発現ベクタ-に再クロ-ニングし目的である色素性乾皮症F群細胞の遺伝子欠損を相補するようなcDNAであるかどうかの確認を進めている。2ファンコニ-貧血症患者に欠損する遺伝子を相補するcDNAクロ-ニング各種cDNAライブラリ-をEBウイルスでトランスフォ-ムした患者由来の末梢血リンパ細胞株、HSC99に導入し1と同様あらかじめハイグロマイシン耐性のトランスフォ-マントを分離後さらにマイトマイシンCによる選択をおこない2重耐性株を数系統分離した。それらの細胞中1系統でcDNAを有するものがみつかった。この系統は親株であるHSC99と正常細胞株のほぼ中間のマイトマイシンC感受性を示す。現在このcDNAを発現ベクタ-に再クロ-ニングしファンコニ-貧血症患者に欠損する遺伝子を相補するようなcDNAであるかどうかの確認を急いでいる。

1 pigment dry skin disease F group of heritage 伝 son の ク ロ - ニ ン グ ヒ ト peripheral blood cells な ら び に various ヒ ト origin cells か ら made し た cDNA ラ イ ブ ラ リ - を SV40 ウ イ ル ス で ト ラ ン ス フ ォ - ム さ れ た pigmentary dry skin disease F group of cells, XP2YO (SV) に エ レ ク ト ロ ポ レ - シ ョ ン で import し ラ イ ブ ラ リ - on の 択 マ カ - で あ る ハ イ グ ロ マ イ シ ン patience heritage 伝 son を with い cDNA ラ イ ブ ラ リ - を very に カ バ - す る most の ト ラ ン ス フ ォ - マ ン ト を separation し た. Youdaoplaceholder0 た れら れら に cells に ultraviolet radiation を counteraction <s:1> ultraviolet radiation に resistance <e:1> 12 system を た. こ れ ら の cells は polices according to area で そ の よ う な 2 weight tolerance plant が now わ れ て い な い こ と か ら complex 帰 suddenly - different strains で あ る は unlikely い と expect で き る. の こ れ ら の cells more く は XP2YO (SV) と HeLa S3 cell の ほ ぼ の ultraviolet sensitivity among を し, そ れ ら の cells に は plural の cDNA を have し て い る こ と が Ming か と な っ た. Now PCR に よ り rights of さ れ た こ れ ら cDNA を 発 now ベ ク タ again - に ク ロ - ニ ン グ し purpose で あ る pigmentary dry skin disease F の but 伝 son owe loss を group of cells fill す る よ う な cDNA で あ る か ど う か の confirm を into め て い る. 2 フ ァ ン コ ニ に owe loss - anemia patients す る posthumous son 伝 を phase fill す る cDNA ク ロ - ニ ン グ various cDNA ラ イ ブ ラ リ - を EB ウ イ ル ス で ト ラ ン ス フ ォ - ム し た origin リ の peripheral blood in patients with ン パ cell lines, HSC99 に import し 1 と with others あ ら か じ め ハ イ グ ロ マ イ シ ン patience の ト ラ ン ス フ ォ - マ ン ト を After separation, さらに さらに ト ト シ シ Cによる select 択をお 択をお な な を 2 multiple tolerant strains を number system separation た た. In それら それら cells, there is a system of でcDNAを, which includes する <s:1> がみ がみ った った った った った. The <s:1> <s:1> system <s:1> parent strain であるHSC99と normal cell line <s:1> ほぼ intermediate <s:1> ト ト シ シ <s:1> C susceptibility を shows す. Now こ の cDNA を 発 now ベ ク タ again - に ク ロ - ニ ン グ し フ ァ ン コ ニ に owe loss - anemia patients す る posthumous son 伝 を phase fill す る よ う な cDNA で あ る か ど う か の confirm を urgent い で い る.

项目成果

George Koike: "Purification,structure,and biochemical properties of human O^6ーmethylguanineーDNA methyltransferase." J.Biol.Chem.265. 14754-14762 (1990)

George Koike：“人 O^6-甲基鸟嘌呤-DNA 甲基转移酶的纯化、结构和生化特性。J.Biol.Chem.265 (1990)。

Hiroshi Hayakawa: "Expression and cloning of complementary DNA for a human enzyme that repairs O^6ーmethylguanine in DNA." J.Mol.Biol.213. 739-747 (1990)

Hiroshi Hayakawa：“修复 DNA 中 O^6ー甲基鸟嘌呤的人类酶的互补 DNA 的表达和克隆。”J.Mol.Biol.213 (1990)。

Renu A.Heller: "Amplified Expression of Tumor Necrosis Factor Receptor in Cells Transfected with EpsteinーBarr Virus Shuttle Vector cDNA Libraries." J.Biol.Chem.265. 5708-5717 (1990)

Renu A.Heller：“用 Epstein-Barr 病毒穿梭载体 cDNA 文库转染的细胞中肿瘤坏死因子受体的扩增表达。J.Biol.Chem.265 (1990)。