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パッチクランプ法による細菌細胞のイオントランスポーターの解析

膜片钳法分析细菌细胞中的离子转运蛋白

基本信息

批准号：
13780536
负责人：
黒田照夫
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

平成13年度末に東京大学分子細胞生物学研究所より譲り受けたパッチクランプシステムの再構築を行った。機器の老朽化などの理由により、すぐには使用できなかったが、修理を重ねた結果、システムとして稼動することができた。平成13年度に検討を行った宿主大腸菌の巨大化条件を用い、大腸菌Na^+-セリン共輸送系であるSstTの輸送活性をパッチクランプ法により測定した。さまざまな条件検討を重ねたが、現在までのところ、有意な輸送活性を捉えることはできていない。この原因として、SstTの発現量がまだ不足している、用いている大腸菌の細胞膜が特に脆弱である、などの理由が挙げられる。一方では大量発現したSstTの精製方法を確立し、幾つかの性質について調べた(Kim,2002)。上記SstTと共に、大腸菌多剤排出ポンプAcrABの活性をパッチクランプ法によって測定した。SstTで有意な活性が得られていない理由の一つは発現量が少ないことであるが、AcrABの場合、特別な大量発現プラスミドを構築しなくとも十分量のタンパク質が発現している。こちらも活性は捉えられていないが、条件検討を重ねれば活性を捉えることができると考えられる結果を得ている。一方で、いくつかの細菌から新規多剤排出ポンプの遺伝子クローニングを行った。腸内連鎖球菌、セラチア、緑膿菌、セパシアなどから得られたものについてその性質を解析した(Cheng2003,Lee2003)。

At the end of 2013, the Institute of Molecular and Cell Biology, University of Tokyo, was reorganized. The reason for the aging of the machine is that it is used, repaired, and operated. The conditions for the amplification of host coliform bacteria were studied in the 13th year of Pingcheng. The transport activity of SstT in Escherichia coli Na^+-C_3 co-transport system was measured by the method of "selection". The conditions for the transfer of activity are discussed in detail. The reasons for this are that the amount of SstT produced is insufficient, the cell membrane of Escherichia coli is particularly fragile, and the reasons for this are insufficient. A large number of SstT refining methods have been established, and several properties have been adjusted (Kim,2002). The activity of SstT and E. coli multi-agent excretion was determined by the method of "separation and purification". SstT is intended to be active for a reason, but the amount of occurrence is small, and in the case of AcrAB, the amount of occurrence is particularly large. The activity of the enzyme is determined by the activity of the enzyme, the condition of the enzyme and the result of the enzyme. One side, the middle of the bacteria, the new rules, the new rules, the Analysis of the properties of Enterococcus, Pseudomonas aeruginosa, and Pseudomonas spp.(Cheng2003,Lee2003).