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パッチクランプ法による細菌細胞のイオン輸送系の包括的解析

利用膜片钳法综合分析细菌细胞离子传输系统

基本信息

批准号：
16013233
负责人：
黒田照夫
金额：
$ 3.78万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16013233/
关键词：
パッチクランプ法多剤排出ポンプイオン輸送系

项目摘要

1.多剤排出ポンプの大量発現プラスミドの作成と大量発現及び活性測定アラビノースプロモーターを用いた大量発現系を構築できた。通常細胞では問題なく発現させることができるが、巨大プロトプラストでは、発現させると細胞膜の脆弱さがさらに進む、あるいはパッチクランプ法に適用できるほど巨大化できない、など不具合が生じた。条件検討をさらに重ね、ようやく活性測定できる態勢は整えることはできたが、活性を捉えるにはいたっていない。またリポソームへの再構成後、そのリポソームを巨大化させるという別の観点からのアプローチも急遽進めている。2.新規多剤排出ポンプ遺伝子のクローニング肺炎桿菌、腸炎ビブリオ、non-01コレラ菌、緑膿菌、セラチア、黄色ブドウ球菌から、機能相補の面及び一次構造の類似性の面から多剤排出ポンプ遺伝子をクローニングした。合計30種程度の新規多剤排出ポンプについて現在解析を行っており、そのうち半数以上がすでに解析を終了している(投稿準備中)。またNa^+/H^+アンチポーターについても解析を行った(Kuroda(2004))。3.大腸菌巨大プロトプラストにおける遺伝子発現プロファイルの解析パッチクランプ法による解析をさらに行いやすくするために、大腸菌巨大プロトプラストにおける遺伝子発現プロファイルを解析した。現在詳細なデータ解析を行っており、その結果を基に巨大化法の改善策などを決定する。4.黄色ブドウ球菌の巨大化及びパッチクランプ法による活性測定グラム陰性菌である大腸菌だけでなく、グラム陽性菌である黄色ブドウ球菌で巨大化の方法を新たに見出した。そして呼吸鎖、F-type ATPaseの活性をパッチクランプ法で捉えることに成功した(投稿準備中)。さらに細菌細胞よりも解析が進んでいる酵母についてパッチクランプ法による解析を行った(Kuroda(2004))。

1. There is a large amount of waste water in the discharge system. Now, the activity of the system is very high. In general, there are some problems, such as poor health, poor health. The condition is different, the activity is measured, the activity is measured, and the activity is measured. After the system has been reorganized, it has been greatly improved. two。 According to the new regulations, the bacteria of pneumoniae, pneumoniae, non-01, Fusarium oxysporum, Streptococcus fuliginosus, Fusarium oxysporum, and the same type of bacteria can be excreted in the same area. in the new regulation, the bacteria of pneumoniae, bacillus pneumoniae, bacteria of pneumonia, bacteria of pneumoniae, bacteria of phlebitis, bacteria of yellow spores, machine phase and one-time similarity were excreted. A total of 30 levels of new regulations have been released. Now, more than half of all banks have completed their applications (preparation for submission). Parse rows (Kuroda (2004)). 3. The giant fungus is very large, and there is a great deal of disease in the body of a child. Now we are going to make a decision on how to improve the strategy by analyzing the results of the analysis. 4. The maximization of xanthococci and the determination of the activity of xanthococci were used to determine the activity of xanthococci. Breathing, F-type ATPase activity, activity, success (preparation for submission). The method of cell culture analysis (Kuroda (2004)) was used to analyze the yeast cells.