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パッチクランプ法を用いた細菌細胞のイオン輸送タンパク質の網羅的解析

膜片钳法综合分析细菌细胞内离子转运蛋白

基本信息

批准号：
14014234
负责人：
黒田照夫
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14014234/
关键词：
パッチクランプ法多剤排出ポンプイオン輸送タンパク質

项目摘要

1、イオン輸送タンパク質の大量発現プラスミドの作成と大量発現-大腸菌Na^+-セリン共輸送タンパク質SstT及びコレラ菌ATP駆動型多剤排出ポンプVcaMの大量発現プラスミドを構築した。前者についてはこれを基に精製・再構成を行いその性質について解析をおこなった(Kim 2002)。後者については予想ほど大量発現ができておらず、現在プラスミドの再構築を検討している。2、機能未知膜タンパク質の遺伝子クローニング-10種の新規多剤排出ポンプの遺伝子を黄色ブドウ球菌、緑膿菌、セラチア、セパシアなどからクローニングし解析を行った(Cheng 2003, Lee 2003)。3、パッチクランプシステムの構築-購入したデータレコーダーを組み合わせ、パッチクランプシステムを立ち上げた。4、パッチクランプ法による測定-大腸菌Na^+セリン共輸送系であるSstTの輸送活性をパッチクランプ法により測定した。さまざまな条件検討を重ねたが、現在までのところ、有意な輸送活性を捉えることはできていない。この原因として、SstTの発現量がまだ不足している、用いている大腸菌の細胞膜が特に脆弱である、などの理由が挙げられる。上記SstTと共に、大腸菌多剤排出ポンプAcrABの活性をパッチクランプ法によって測定した。これはSstTで有意な活性が得られていない理由の一つが発現量が少ないことであり、AcrABの場合、特別な大量発現プラスミドを構築しなくとも十分量のタンパク質が発現しているからである。こちらも活性は捉えられていないが、条件検討を重ねれば活性を捉えることができると考えられる結果を得ている。

1. A large number of SstT and ATP can be excreted and excreted in large quantities. There are a large number of VcaM. The former is reorganized into a line of information on the basis of data analysis (Kim 2002). After that, I would like to know that there are a lot of people who want to see a lot of money, and now I want to tell you that there are a lot of problems. 2. The function of the unknown membrane was not known. The new regulation was used to expel the spores of Flavobacterium, Fusarium oxysporum, Fusarium oxysporum and Fusarium oxysporum (Cheng 2003, Lee 2003). 3. Please tell me that you need to make sure that you do not know what to do, and that you will not be able to do so. 3. 4. Use the SstT method to determine the activity of the bacteria Na ^ + Na ^. The condition is very important. Now, I want to send you something that you want to know. The cause of the disease, the amount of SstT, the amount of the bacteria, the membrane of the cell, the cause, the membrane, the cause, the cause, The SstT method was used to determine the activity of AcrAB. The SstT is intended to be active because there are a lot of reasons for the increase in the amount of money, the combination of AcrAB, and a large number of high-volume production costs. The results show that the results of the test show that the results show that there is no significant difference between the two groups.