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パッチクランプ法による細菌細胞の多剤排出ポンプの解析

使用膜片钳方法分析细菌细胞中的多药外排泵

基本信息

批准号：
16790054
负责人：
黒田照夫
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790054/
关键词：
パッチクランプ法多剤排出ポンプイオン輸送系

项目摘要

1.多剤排出ポンプの大量発現プラスミドの作成と大量発現及び活性測定昨年度構築したアラビノースプロモーターを用いた大量発現系については、通常細胞では問題なく発現させることができることから系としては問題ないことを示した。しかし巨大プロトプラストにおいて発現させると、通常細胞で見られたほどの大量発現は見られなかった。また発現量の観点から最適な条件においては細胞が十分に巨大化しておらず、このままではパッチクランプ法に適用することができないと考えられた。そこで条件検討をさらに検討した結果、いまだ最適とはいえないが、現時点では最高の条件を見出すことができたと考えられる。活性測定も行ったが現時点では細胞が小さく、極めて難しい状態である。このことは研究開始時点では全く予想できなかったことである。以上のことから更なる改善を行うためには、抜本的な発現系の改善が必須であることがわかった。そのためには巨大プロトプラスト内ではどのような遺伝子の発現が亢進されているのかを解析し、その遺伝子のプロモーター領域の塩基配列を利用すればよいという考えに至った。マイクロアレイ解析からいくつかの候補遺伝子を選ぶことができた。このような大量発現系は極めて珍しいものになると考えられる。2.新規多剤排出ポンプ遺伝子のクローニング肺炎桿菌、腸炎ビブリオ、non-01コレラ菌、緑膿菌、セラチア、黄色ブドウ球菌(MRSA)、アシネトバクターから、機能相補の面及び一次構造の類似性の面から多剤排出ポンプ遺伝子をクローニングした。合計40種程度の新規多剤排出ポンプについて現在解析を行っており、いくつかは論文発表を行った。特に黄色ブドウ球菌(MRSA)についてはゲノム配列上予想されるすべてのものについて解析を行うことができた。これは病原性細菌では初めての例である。

1. The discharge of a large amount of water has caused a large number of problems. The results show that a large number of people were used in the past year. In general, there are a lot of problems in the system. There is a great deal of evidence that there are a lot of problems, and usually there are a lot of problems. This is the most important thing in this paper. The most important condition is that the cell size is very large. Check the conditions to verify the results, the most expensive conditions, and the maximum conditions at different times to verify the results of the test. The activity is determined. At the same time, the cell temperature is small, and the state of the cell is affected. At the beginning of the study, I would like to make sure that I do not want to start the study. The above information is required to improve the performance of the system, and it is necessary to improve the system. In the middle of the day, there is an increase in the number of people in the area. there is an increase in the number of people in the area. in the first place, there is an increase in the number of people in the field. Please tell me that you are waiting for your child to select your child. There are a large number of people who are interested in the study. two。 In the new regulation, the bacteria of pneumonia, inflammation, non-01, Flavobacterium, Flavobacterium, Chlamydia trachomatis, machine can be compared with each other and similar to each other at one time. A total of 40 levels of new regulations have been released. We are now parsing the data of the banks and the tables of the documents. There is a special list of MRSA bacteria, bacteria and bacteria. The pathogenic bacteria were found to be the first to be diagnosed.

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Gene cloning and characterization of four MATE family multidrug efflux pumps from Vibrio cholerae Non-01

霍乱弧菌 Non-01 的四个 MATE 家族多药外排泵的基因克隆和表征

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Microbiol.Immunol. 49
影响因子：
0
作者：
Hatano;T. et al.;Begum A. et al.;Mima T.et al.;Su X-Z.et al.;Otsuka M. et al.;Kuroda T. et al.;Hatano T. et al.;Anowara Begum et al.
通讯作者：
Anowara Begum et al.

Gene Cloning and Properties of the RND‐Type Multidrug Efflux Pumps MexPQ‐OpmE and MexMN‐OprM from Pseudomonas aeruginosa