免疫系レセプターのファージ提示系による高機能化と立体構造解析による機構解明

利用噬菌体展示系统改善免疫系统受体的功能并通过三维结构分析阐明其机制

• 批准号: 13780541
• 负责人: 前仲 勝実
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kyushu University (2002)National Institute of Genetics (2001)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780541/
• 关键词: 免疫系レセプター; Ig-like receptor; X線結晶構造解析; 主要組織適合性抗原; 分子認識; 蛋白質間相互作用; ファージディスプレイ; ランダム変異ライブラリー

<背景と目的>免疫系細胞表面に発現する様々なレセプターは細胞間の情報伝達に関与し、様々な疾患に直接結びつくことから、医学的に大変重要である。申請者らは幅広い免疫細胞に見出されてきた免疫レセプター抑制性モチーフ(ITIM)を持つ抑制性免疫レセプタースーパーファミリー(Inhibitory-receptor superfamily,以下IRSと省略する)に着目した。このファミリーの多くは免疫グロブリン(Ig)様ドメインを持ちながら、多様なリガンドを認識するため、レセプターの分子認識を解析するには格好の標的であると考えられる。そこで本研究は、IRSレセプターの高機能化を目指して、ファージ提示系を用いて膨大なライブラリーからリガンドに対する高親和性を示すレセプターを選択し、さらに高親和性のメカニズムをX線結晶構造解析により明らかにすることを目的とした。<検討結果と考察>本年度はIRSファミリーであるKIRについて、ファージ提示系を持ちいた2量体レセプターファージの作製を行ってきたが、現在まで大腸菌の発現系を利用して作製したリガンドMHCとの結合の確認に成功していない。2量体蛋白質を作成し、実際の蛋白質レベルで結合の上昇が見られるかどうか今後確認する予定である。他方、IRSファミリーのFcγRファミリーについては、FcγRファージの作製に取り組んでいるが、現在までFcとの結合は確認できていない。しかし、FcγRに対して結合可能なペプチドをランダムペプチドファージライブラリーを用いて検索中である。これまでにいくつかのFcγRに対して親和性を示すペプチド配列の候補が得られてきている。これらのペプチドの一部を作成したところ、FcγRに対してnative gel上で結合するラとが確認できた。これらを機能構造解析に今後持ち込んで、詳細な分子認識機構を明bかにすると同時に、創薬へと結びつける基盤となるようにする予定である。

<Background and Purpose> Information on the surface of immune system cells and between cells It is directly related to diseases and diseases, and it is of great importance in medicine. The applicant's immune cells are immune cells and immune cells are suppressed (ITIM). Inhibitory-receptor superfamily, the following IRS is omitted (する) and the purpose is the same. Immune immune system (Ig)であると考えられる.そこでThis researchは、IRSレセプターのHigh-functionality をObject refers to して、フThe ァージ prompt system is used to expand the なライブラリーからリガンドに対するHigh-affinity high-affinity high-affinity high-affinity high-affinity productsズムをX-ray crystal structure analysis により明らかにすることをpurpose とした. <Results and Inspection> This year's IRS はファミリーであるKIR について, ファージtip system をhold ちいた2 measuring body レセプターファージの成を行ってきたが、Now までEliform coliform の発行をutilization してしたリガンドMHC とのcombination のconfirmation していない. 2. The amount of protein in the body is made, and the protein in the body is bound to rise. It will be confirmed in the future. Other parties, IRSファミリーのFcγRファミリーについては, FcγRファージのproducedにtakeり组んでいるが、Now までFcとの合はconfirmedできていない. The combination of しかし and FcγR に対して is possibleなペプチドをランダムペプチドファージライブラリーを Use いて検SO中である.これまでにいくつかのFcγRに対してaffinityをshowすペプチドmatched rankの candidateがgetられてきている.これらのペプチドの一出したところ, FcγRに対してnative gel on でcombination するラとがconfirmed できた.これらをFunctional structure analysisに下注ち込んで、Detailed molecular understanding mechanismを明bかにするとsimultaneousに、Creation 薬へと knot びつけるbase base となるようにするpredeterminedである.

项目成果

松井: "Detection of autoantibodies to killer immunoglobulin-like receptors using recombinant fusion proteins for two killer immunoglobulin-like receptors in patients with systemic autoimmune diseases"Arthritis and Rheumatism. 44. 384-388 (2001)

Matsui：“使用针对全身性自身免疫性疾病患者的两种杀伤性免疫球蛋白样受体的重组融合蛋白检测杀伤性免疫球蛋白样受体的自身抗体”关节炎和风湿病。

前仲: "The human low affinity Fcγ receptors IIa, IIb, and III bind IgG with fast kinetics and distinct thermodynamic properties"Journal of Biological Chemistry. 276. 44898-44904 (2001)

Maenaka：“人类低亲和力 Fcγ 受体 IIa、IIb 和 III 以快速动力学和独特的热力学特性结合 IgG”《生物化学杂志》276. 44898-44904 (2001)。

前仲: "Activating and Inhibitory Immunoglobulin-Like Receptors"Molecular recognition by Ig-like receptors, KIRs and FcγRs.. 45-54 (2001)

前中：“激活和抑制性免疫球蛋白样受体”Ig 样受体、KIR 和 FcγR 的分子识别.. 45-54 (2001)

前仲: "蛋白質核酸酵素別冊 蛋白質科学の進展"免疫系レセプターの分子認識. 1805-1811 (2001)

前中：《蛋白质核酸酶分卷蛋白质科学进展》免疫系统受体的分子识别1805-1811（2001）。

植村: "Systematic analysis of the combinatorial nature of epitopes recognized by TCR leads to identification of mimicry epitopes for glutamic acid decarboxylase 65-specific TCRs"Journal of Immunology. 170. 947-960 (2003)

Uemura：“对 TCR 识别的表位组合性质进行系统分析，可鉴定谷氨酸脱羧酶 65 特异性 TCR 的拟态表位”《免疫学杂志》170. 947-960 (2003)。