免疫系レセプターのファージ提示系による高機能化と立体構造解析による機構解明

利用噬菌体展示系统改善免疫系统受体的功能并通过三维结构分析阐明其机制

基本信息

批准号：
13780541
负责人：
前仲勝実
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kyushu University (2002)National Institute of Genetics (2001)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

<背景と目的>免疫系細胞表面に発現する様々なレセプターは細胞間の情報伝達に関与し、様々な疾患に直接結びつくことから、医学的に大変重要である。申請者らは幅広い免疫細胞に見出されてきた免疫レセプター抑制性モチーフ(ITIM)を持つ抑制性免疫レセプタースーパーファミリー(Inhibitory-receptor superfamily,以下IRSと省略する)に着目した。このファミリーの多くは免疫グロブリン(Ig)様ドメインを持ちながら、多様なリガンドを認識するため、レセプターの分子認識を解析するには格好の標的であると考えられる。そこで本研究は、IRSレセプターの高機能化を目指して、ファージ提示系を用いて膨大なライブラリーからリガンドに対する高親和性を示すレセプターを選択し、さらに高親和性のメカニズムをX線結晶構造解析により明らかにすることを目的とした。<検討結果と考察>本年度はIRSファミリーであるKIRについて、ファージ提示系を持ちいた2量体レセプターファージの作製を行ってきたが、現在まで大腸菌の発現系を利用して作製したリガンドMHCとの結合の確認に成功していない。2量体蛋白質を作成し、実際の蛋白質レベルで結合の上昇が見られるかどうか今後確認する予定である。他方、IRSファミリーのFcγRファミリーについては、FcγRファージの作製に取り組んでいるが、現在までFcとの結合は確認できていない。しかし、FcγRに対して結合可能なペプチドをランダムペプチドファージライブラリーを用いて検索中である。これまでにいくつかのFcγRに対して親和性を示すペプチド配列の候補が得られてきている。これらのペプチドの一部を作成したところ、FcγRに対してnative gel上で結合するラとが確認できた。これらを機能構造解析に今後持ち込んで、詳細な分子認識機構を明bかにすると同時に、創薬へと結びつける基盤となるようにする予定である。

<背景和目的>在免疫系统表面表达的各种受体参与细胞 - 细胞传播，并与各种疾病直接相关，使其在医学上极为重要。申请人专注于在广泛的免疫细胞中发现的抑制性受体超家族（以下简称IRS）。该家族的许多家族具有免疫球蛋白（IG）样结构域并识别多种配体，使其被认为是分析受体分子识别的理想目标。因此，为了提高IRS受体的功能，目的是选择使用噬菌体表现系统对来自庞大文库的配体具有高亲和力的受体，并通过X射线结构结构分析进一步阐明高亲和力的机制。 <结果与讨论>今年，我们一直在为IRS家族KIR提供噬菌体表现系统的二聚体受体噬菌体，但是到目前为止，我们尚未成功证实与使用大肠杆菌表达系统生产的配体MHC的结合。我们将创建二聚体蛋白质并检查将来是否可以看到实际蛋白水平的结合增加。另一方面，IRS家族的FCγR家族一直在研究FcγR噬菌体的生产，但迄今为止，尚未确认与FC的结合。但是，正在使用随机肽噬菌体文库搜索能够与FcγR结合的肽。迄今为止，已经获得了对几个FcγR的亲和力的候选肽序列。当制备这些肽中的某些时，可以确认FcγR对天然凝胶的结合。这些将来将在未来进行功能结构分析，并将成为将详细的分子识别机制与药物发现联系起来的基础。