ラッフル膜形成に関わるWAVEの機能制御機構の解析

WAVE2に特異的に結合する因子として見付けたIRSp53の結合蛋白解析を行った。Sラベルした細胞溶解物を用いた解析からいくつかの結合蛋白の存在が示唆されていたが、その解析をスケールアップして質量分析によって主要な結合蛋白を同定した。NIH3T3細胞溶解物からはEps8と呼ばれる蛋白が同定された。これは細胞内においてAbil、Sos、PI3キナーゼなどと複合体を作り、WAVEファミリーの上流に位置するRacを活性化することが報告されている。IRSp53とEps8を共発現すると、Racの活性化が顕著に促進された。つまり、IRSp53はEps8と結合することによってRacを制御する機能も持っていることが明らかとなった。IRSp53がRacの直接の下流にも位置することを考えると、Racの機能制御において自己促進的なフィードバックループが存在していることを示唆しており、非常に興味深い。また、上述したIRSp53の結合蛋白解析でNIH3T3やN1E-115細胞溶解物から最も主要なものとして約120kDa、60kDaの蛋白が見付かっていたが、これらはSF3a複合体の2つのサブユニットであった。SF3a複合体はRNAスプライシング反応に関わる蛋白複合体であり、その3つのサブユニットSF3a60、SF3a66、SF3a120はそれぞれ酵母から保存されている。IRSp53は神経芽細胞腫に発現させると神経突起形成などの顕著な形態変化を誘導する。SF3a複合体の各サブユニットを発現させたところ、SF3a120は予想通りに核内に集積したが、SF3a60とSF3a66は細胞質に存在した。しかも、SF3a66の発現はIRSp53と同様の神経突起形成などの形態変化を誘導し、内在性のSF3a66が細胞質に存在することを示す免疫染色データも得られている。つまり、従来核内でのRNAスプライシング反応に(のみ)関わると考えられてきたSF3a複合体が、全く異なる細胞機能に関与している可能性が示唆された。

WAVE2に特異的に結合する因子として見付けたIRSp53の結合蛋白解析を行った。Sラベルした細胞溶解物を用いた解析からいくつかの結合蛋白の存在が示唆されていたが、その解析をスケールアップして質量分析によって主要な結合蛋白を同定した。NIH3T3細胞溶解物からはEps8と呼ばれる蛋白が同定された。これは細胞内においてAbil、Sos、PI3キナーゼなどと複合体を作り、WAVEファミリーの上流に位置するRacを活性化することが報告されている。IRSp53とEps8を共発現すると、Racの活性化が顕著に促進された。つまり、IRSp53はEps8と結合することによってRacを制御する機能も持っていることが明らかとなった。IRSp53がRacの直接の下流にも位置することを考えると、Racの機能制御において自己促進的なフィードバックループが存在していることを示唆しており、非常に興味深い。また、上述したIRSp53の結合蛋白解析でNIH3T3やN1E-115細胞溶解物から最も主要なものとして約120kDa、60kDaの蛋白が見付かっていたが、これらはSF3a複合体の2つのサブユニットであった。SF3a複合体はRNAスプライシング反応に関わる蛋白複合体であり、その3つのサブユニットSF3a60、SF3a66、SF3a120はそれぞれ酵母から保存されている。IRSp53は神経芽細胞腫に発現させると神経突起形成などの顕著な形態変化を誘導する。SF3a複合体の各サブユニットを発現させたところ、SF3a120は予想通りに核内に集積したが、SF3a60とSF3a66は細胞質に存在した。しかも、SF3a66の発現はIRSp53と同様の神経突起形成などの形態変化を誘導し、内在性のSF3a66が細胞質に存在することを示す免疫染色データも得られている。つまり、従来核内でのRNAスプライシング反応に(のみ)関わると考えられてきたSF3a複合体が、全く異なる細胞機能に関与している可能性が示唆された。