ラッフル膜形成に関わるWAVEの機能制御機構の解析

WAVE与荷叶膜形成相关的功能控制机制分析

• 批准号: 13780568
• 负责人: 三木 裕明
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780568/
• 关键词: WAVE; IRSp53; Eps8; Rac; SF3a複合体; 質量分析; WASP; Arp2; 3複合体; N1E-115

WAVE2に特異的に結合する因子として見付けたIRSp53の結合蛋白解析を行った。Sラベルした細胞溶解物を用いた解析からいくつかの結合蛋白の存在が示唆されていたが、その解析をスケールアップして質量分析によって主要な結合蛋白を同定した。NIH3T3細胞溶解物からはEps8と呼ばれる蛋白が同定された。これは細胞内においてAbil、Sos、PI3キナーゼなどと複合体を作り、WAVEファミリーの上流に位置するRacを活性化することが報告されている。IRSp53とEps8を共発現すると、Racの活性化が顕著に促進された。つまり、IRSp53はEps8と結合することによってRacを制御する機能も持っていることが明らかとなった。IRSp53がRacの直接の下流にも位置することを考えると、Racの機能制御において自己促進的なフィードバックループが存在していることを示唆しており、非常に興味深い。また、上述したIRSp53の結合蛋白解析でNIH3T3やN1E-115細胞溶解物から最も主要なものとして約120kDa、60kDaの蛋白が見付かっていたが、これらはSF3a複合体の2つのサブユニットであった。SF3a複合体はRNAスプライシング反応に関わる蛋白複合体であり、その3つのサブユニットSF3a60、SF3a66、SF3a120はそれぞれ酵母から保存されている。IRSp53は神経芽細胞腫に発現させると神経突起形成などの顕著な形態変化を誘導する。SF3a複合体の各サブユニットを発現させたところ、SF3a120は予想通りに核内に集積したが、SF3a60とSF3a66は細胞質に存在した。しかも、SF3a66の発現はIRSp53と同様の神経突起形成などの形態変化を誘導し、内在性のSF3a66が細胞質に存在することを示す免疫染色データも得られている。つまり、従来核内でのRNAスプライシング反応に(のみ)関わると考えられてきたSF3a複合体が、全く異なる細胞機能に関与している可能性が示唆された。

WAVE2 specifically binds to IRSP53 protein. The presence of binding proteins in cell lysates is indicated by the presence of binding proteins in cell lysates and by the presence of binding proteins in cell lysates. NIH3T3 cell lysate was isolated from Eps8 cells. This is a report on the activation of Abil, Sos and PI3 complexes in the upstream position of WAVE. IRSp53 and Eps8 co-occur, and Rac activation is promoted. The IRSP53 is a combination of Eps8 and Rac control functions. IRSp53 is the direct downstream position of the Rac. The function of the Rac is controlled by the Rac itself. It is very interesting. Analysis of IRSP53 binding protein in NIH 3T3 and N1E-115 cell lysate showed that the most important protein was about 120kDa and 60kDa protein, and the most important protein was SF3a complex. SF3a Complex SF3a 60, SF3a 66, SF3a 120 are preserved in yeast. IRSP53 induces neuronal processes and morphological changes. The SF3a complex was found in the nucleus, SF3a 60 and SF3a 66 in the cytoplasm. The expression of SF3a66 was induced by IRSP53 and morphological changes in the same neuroprocesses, and the presence of intrinsic SF3a66 in the cytoplasm was demonstrated by immunostaining. The possibility that the SF3a complex is involved in cellular function is also discussed.

项目成果

Martinez-Quiles N, et al.: "WIP regulates N-WASP-mediated actin polymerization and filopodium formation"Nature Cell Biology. 3. 484-491 (2001)

Martinez-Quiles N 等人：“WIP 调节 N-WASP 介导的肌动蛋白聚合和丝状足形成”《自然细胞生物学》。

Miki, H., Takenawa, T.: "WAVE2 serves a functional partner of IRSp53 by regulating its interaction with Rac"Biochemical and Biophysical Research Communications. 293. 93-99 (2002)

Miki, H., Takenawa, T.：“WAVE2 通过调节 IRSp53 与 Rac 的相互作用，成为 IRSp53 的功能伙伴”《生物化学和生物物理研究通讯》。

Nakagawa H, Miki H, Ito M, Ohashi K, Takenawa T, Miyamoto S: "N-WASP, WAVE and Mena play different roles in the organization of actin cytoskeleton in lamellipodia"Journal of Cell Science. 114. 1555-1565 (2001)

Nakakawa H、Miki H、Ito M、Ohashi K、Takenawa T、Miyamoto S：“N-WASP、WAVE 和 Mena 在片状伪足中肌动蛋白细胞骨架的组织中发挥不同的作用”细胞科学杂志。

Yamaguchi, H., Miki, H., Takenawa, T.: "Neural Wiskott-Aldrich syndrome protein is involved in hepatocyte growth factor-induced migration, invasion, and tubulogenesis of epithelial cells"Cancer Research. 62. 2503-2509 (2002)

Yamaguchi, H.、Miki, H.、Takenawa, T.：“神经 Wiskott-Aldrich 综合征蛋白参与肝细胞生长因子诱导的上皮细胞迁移、侵袭和管状生成”癌症研究。

Takenawa T, Miki H: "WASP and WAVE family proteins: key molecules for rapid rearrangement of cortical actin filaments and cell movement"Journal of Cell Science. 114. 1801-1809 (2001)

Takenawa T、Miki H：“WASP 和 WAVE 家族蛋白：皮质肌动蛋白丝快速重排和细胞运动的关键分子”《细胞科学杂志》。