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ラッフル膜形成に関わるWAVEの機能制御機構の解析

WAVE与荷叶膜形成相关的功能控制机制分析

基本信息

批准号：
13780568
负责人：
三木裕明
金额：
$ 1.6万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780568/
关键词：
WAVE IRSp53 Eps8 Rac SF3a複合体質量分析 WASP Arp2 3複合体 N1E-115

项目摘要

WAVE2に特異的に結合する因子として見付けたIRSp53の結合蛋白解析を行った。Sラベルした細胞溶解物を用いた解析からいくつかの結合蛋白の存在が示唆されていたが、その解析をスケールアップして質量分析によって主要な結合蛋白を同定した。NIH3T3細胞溶解物からはEps8と呼ばれる蛋白が同定された。これは細胞内においてAbil、Sos、PI3キナーゼなどと複合体を作り、WAVEファミリーの上流に位置するRacを活性化することが報告されている。IRSp53とEps8を共発現すると、Racの活性化が顕著に促進された。つまり、IRSp53はEps8と結合することによってRacを制御する機能も持っていることが明らかとなった。IRSp53がRacの直接の下流にも位置することを考えると、Racの機能制御において自己促進的なフィードバックループが存在していることを示唆しており、非常に興味深い。また、上述したIRSp53の結合蛋白解析でNIH3T3やN1E-115細胞溶解物から最も主要なものとして約120kDa、60kDaの蛋白が見付かっていたが、これらはSF3a複合体の2つのサブユニットであった。SF3a複合体はRNAスプライシング反応に関わる蛋白複合体であり、その3つのサブユニットSF3a60、SF3a66、SF3a120はそれぞれ酵母から保存されている。IRSp53は神経芽細胞腫に発現させると神経突起形成などの顕著な形態変化を誘導する。SF3a複合体の各サブユニットを発現させたところ、SF3a120は予想通りに核内に集積したが、SF3a60とSF3a66は細胞質に存在した。しかも、SF3a66の発現はIRSp53と同様の神経突起形成などの形態変化を誘導し、内在性のSF3a66が細胞質に存在することを示す免疫染色データも得られている。つまり、従来核内でのRNAスプライシング反応に(のみ)関わると考えられてきたSF3a複合体が、全く異なる細胞機能に関与している可能性が示唆された。

The binding factor of WAVE2 specific protein was analyzed by IRSp53 binding protein analysis. The lysates of S cells were analyzed by Elisa. The binding proteins were identified by quantitative analysis of the main binding proteins. NIH3T3, lysate, Eps8, protein, protein, protein. In the cell, Abil, Sos, PI3, complex, WAVE, Rac, activation, report, activation, replication, activation, activation, activation, IRSp53 "Eps8" has been realized, and Rac has been activated to promote the development of cancer. The equipment, the IRSp53 Eps8 and the combination of the equipment, the Rac, the control machine, the equipment, the control, the control and the control. The IRSp53 Rac directly affects the location, the location, the test, the Rac machine, and the ability to control the presence of symptoms, which can be promoted by the machine itself. NIH3T3, N1E-115Cellular lysate, 120kDa, 60kDa protein, SF3a complex and SF3a complex were analyzed. SF3a complex, RNA, SF3a120, SF3a60, SF3a66, SF3a120, yeast, yeast, protein, protein. The sprouts of the IRSp53 show that they are protruding to form a shape-oriented guide. The SF3a replicates were isolated from each gene, and SF3a120 was found to be present in the nuclei, SF3a60, SF3a66 and cells. The IRSp53 and SF3a66 images showed that the processes of the IRSp53 were the same as those of the brain, and the presence of internal SF3a66 cells showed that the immune staining was successful. In the core of the system, the RNA system is used to detect the possibility that the SF3a complex, the whole system and the possibility of failure can be detected.