遺伝子発現リアルタイムモニターシステムの開発

实时基因表达监测系统的开发

• 批准号: 13780637
• 负责人: 山口 瞬
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780637/
• 关键词: 時計遺伝子; 体内時計; 概日リズム; トランスジェニックマウス

生きたままのマウスの脳で遺伝子の発現をリアルタイムに観察することを目的にc-fosプロモーターに短時間半減期型のGFPをつないだトランスジェニックマウスの作成を行ってきた。c-fosプロモーターは本来のc-fosと同様の発現をすることが知られている、約7.8Kbの領域を用いた。GFPは生体内で約2時間の半減期と考えられているものを使用した。マウスの受精卵にマイクロインジェクション法でDNAを注入し、トランスジェニックマウスを作成した。既に、5ライン以上を確立し、それぞれのラインのマウスを用いて解析を行っている。夜間、マウスに光を30分照射し、照射後30分後にマウスの脳を取り出し、視交叉上核でのGFP mRNAの発現をin situ hybridizationにより解析した。その結果、全てのラインで、光照射により、視交叉上核に著明なGFP mRNAの誘導を認めた。さらにそのうちの1ラインについては、蛍光顕微鏡による観察で視交叉上核の神経細胞の細胞体が蛍光を発することを確認した。今後これらのマウスを用いて、視交叉上核に光ファイバーを挿入し、生きたマウスで発光を計測することで、遺伝子発現をリアルタイムに観測する。また、Cry1/Cry2ダブルノックアウトマウス、Clockミュータントマウスなどのリズム異常マウスとかけあわせることで、これらのマウスにおけるc-fos遺伝子の反応性を解析する。

The production of GFP with short half-time duration is carried out by the production of c-fos with short half-time duration. c-fos is the same as the original c-fos, and the domain of about 7.8Kb is used. GFP is produced in vivo for about 2 days. DNA injection into sperm cells The above 5 categories are established, and the above 5 categories are analyzed. 30 minutes after irradiation, GFP mRNA expression in the suprachiasmatic nucleus was analyzed. The results showed that GFP mRNA was induced in the suprachiasmatic nucleus by light irradiation. In addition, we can confirm that the cell bodies of the suprachiasmatic nucleus are illuminated by light and microscopes. In the future, the light source will be detected in the optic chiasm, and the light source will be detected in the optic chiasm. Cry1/Cry2

项目成果

岡村均 他: "実地診療に役立つヒトのリズム 時間診療学"永井書店. 268 (2001)

Hitoshi Okamura 等人：“对实际医学治疗有用的人类节律和时间疗法”Nagai Shoten 268 (2001)。

山口瞬: "哺乳類時計遺伝子の転写制御"細胞工学. 20(6). 811-816 (2001)

Shun Yamaguchi：“哺乳动物时钟基因的转录控制”细胞工程20（6）（2001）。

Mitsui S. et al.: "Antagonistic role of E4BP4 and PAR proteins in the circadian oscillatory mechanism"Genes Dev.. 15. 995-1006 (2001)

Mitsui S.等人：“E4BP4和PAR蛋白在昼夜节律振荡机制中的拮抗作用”Genes Dev.. 15. 995-1006 (2001)

Nishiyama K. et al.: "Tyrosine hydroxylase and NADPH-diaphorase in the rat nodose ganglion : colocalization and central projection"Acta Histochem Cytochem.. 34(2). 135-141 (2001)

Nishiyama K.等人：“大鼠结状神经节中的酪氨酸羟化酶和NADPH-心肌黄酶：共定位和中央投射”Acta Histochem Cytochem.. 34(2)。

Asai M.et al.: "Visualization of mPer1 transcription in vitro : NMDA induces a rapid phase shift of mPer1 gene in cultured SCN"Current Biol.. 11(19). 1524-1527 (2001)

Asai M.等人：“体外 mPer1 转录的可视化：NMDA 在培养的 SCN 中诱导 mPer1 基因的快速相移”Current Biol.. 11(19)。