ルシフェラーゼを利用した脳機能の解析

使用荧光素酶分析脑功能

• 批准号: 15029240
• 负责人: 山口 瞬
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15029240/
• 关键词: 記憶; 学習; 遺伝子発現; 可視化; トランスジェニックマウス; 体内時計; 発行

記憶、学習、情動、概日リズムなどの脳の高次機能は、遺伝子の発現調節によって支えられている。ホタルの発光酵素であるルシフェラーゼをレポーターとして、神経細胞における遺伝子の発現変化を、遺伝子工学的手法を用いて可視化することを試みた。ルシフェラーゼには、蛋白分解促進配列やmRNA分解促進配列を付け、ダイナミックな反応性を示すよう改良されたものを用いた。種々の脳機能に関連して発現することの知られている遺伝子、c-fos、Arc、Zif268、mPer1のプロモーターをルシフェラーゼにつなぎ、これらの遺伝子の転写調節の変化を高感度でモニタリングできる系の開発を行った。これらのコンストラクトを、初代培養したラット海馬神経細胞に導入し、発光を経時的に観測することで転写レベルの変化をリアルタイムに観察できる系を開発した。また、記憶、学習に重要なNMDA受容体やMAPキナーゼの活性化に対応して反応することが知られている、serum response elementの配列に、ルシフェラーゼをつないだコンストラクトも作成し、NMDA受容体やMAPキナーゼの活性化をモニターできる系も開発した。Arcのプロモーターとしてマウスのゲノムから単離した7.1kbの領域を用いたが、海馬神経細胞において、発光を長期間モニターするのに十分な活性を示すことを明らかにした。また、NMDA受容体の活性化に対応して反応する領域の検索も行った。

Memory, learning, emotion, general information, high-order functions, genetic development and regulation, The method of gene engineering is used to visualize the gene expression in cells. In addition, the protein decomposition promotion alignment and mRNA decomposition promotion alignment can be used to improve the performance of protein decomposition. The function of the seed is related to the development of the gene, c-fos, Arc, Zif268, mPer1, and the development of the gene is related to the development of the gene. The development of the system was observed during the introduction and development of light into hippocampal neurons in primary culture. The activation of NMDA receptor and MAP is important for memory and learning. The activation of NMDA receptor and MAP is important for memory and learning. The activation of NMDA receptor and MAP is important for memory and learning. Arc's long-term activity is demonstrated by the presence of a 7.1 kb domain, hippocampus cells, and light. The activation of NMDA receptors in the field of detection

项目成果

Terazono H.et al.: "Adrenergic regulation of clock gene expression in the mouse liver."Proc Natl Acad Sci USA.. 100(11). 6795-6800 (2003)

Terazono H.等人：“小鼠肝脏中时钟基因表达的肾上腺素调节。”Proc Natl Acad Sci USA.. 100(11)。

Sujino M.et al.: "Suprachiasmatic nucleus grafts restore circadian behavioral rhythms of genetically arrhythmic mice."Curr Biol.. 13(8). 664-668 (2003)

Sujino M.等人：“视交叉上核移植可恢复遗传性心律失常小鼠的昼夜行为节律。”Curr Biol.. 13(8)。

Matsuo T.et al.: "Control mechanism of the circadian clock for timing of cell, division in vivo."Science. 302. 255-259 (2003)

Matsuo T.等人：“生物钟的控制机制，用于体内细胞、分裂的计时。”科学。

Yamaguchi S.et al.: "Synchronization of cellular clocks in the suprachiasmatic nucleus."Science. 302. 1408-1412 (2003)

Yamaguchi S.et al.：“视交叉上核细胞时钟的同步。”科学。

Nomura K.et al.: "Involvement of calcium/calmodulin-dependent protein kinase II in the induction of mPer1."J Neurosci Res.. 72(3). 384-392 (2003)

Nomura K.等人：“钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II 参与 mPer1 的诱导。”J Neurosci Res. 72(3)。