GAL4-UASシステムを用いた時計遺伝子の解析

使用 GAL4-UAS 系统分析时钟基因

• 批准号: 12053252
• 负责人: 山口 瞬
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12053252/
• 关键词: 体内時計; 時計遺伝子; プロモーター; 視交叉上核; 行動リズム

哺乳類の体内時計は視交叉上核にあり、この核において、時計遺伝子群が約24時間周期で増減をくり返すことによって時を刻んでいる。我々は、時計遺伝子mPer1のプロモーター領域に、昼間は活性型の転写因子DBP、HLF、TEFが結合し転写活性を高め(Mol Cell Biol,2000)、夜になると同じ結合部位に、抑制型の転写因子E4BP4が結合して転写を抑えるという、極めて巧妙なメカニズムが存在することを明らかにした(Genes Dev,印刷中)。このメカニズムは、mPer1 mRNAの発現の振幅を大きくしていると考えられるが、このことを生体内で実証するため、E4BP4のmRNAを視交叉上核で過剰発現するトランスジェニックマウスの作成を試みた。そのためには視交叉上核で十分に発現させることのできるプロモーターが必要であった。我々は、時計遺伝子mPer1のプロモーター領域にルシフェラーゼをつないだトランスジェニックマウスを作成し、mPer1遺伝子の5'上流7.2kbの領域が視交叉上核で周期的な発現をするのに十分な領域であることを明らかにし(Curr Biol,2000)、このトランスジェニックマウスの視交叉上核が、mPer1 mRNAの発現パターンと一致して発光することを示した(Nature,2001)。したがって、mPer1遺伝子の5'上流7.2kbのDNAは、この目的にふさわしいプロモーターである。mPer1プロモーターにUAS及びGAL4をつなぎ視交叉上核でGAL4が過剰発現するトランスジェニックマウスと、UASにE4BP4をつなぎGAL4存在下でE4BP4が過剰発現するトランスジェニックマウスを現在作成しており、行動リズム、既知の時計遺伝子の発現パターンを解析する予定である。

In mammals, the time period is about 24 hours. The time domain of mPer1, the daytime active type of DBP, HLF, TEF and their binding activity are high (Mol Cell Biol,2000), the night time domain of mPer 1 and their binding sites are high (Genes Dev, in print), and the inhibition type of mPer 1 and its binding activity is high (Genes Dev, in print). The expression of mPer1 mRNA was detected in vivo, and the expression of mPer1 mRNA was detected in the supraclavicular nucleus of the optic chiasm. It's a must for you. The time domain of mPer1 is created and the 5'upstream 7.2kb domain of mPer1 is generated.(Curr Biol,2000), the expression of mPer1 mRNA in the suprachiasmatic nucleus and the expression of mPer1 mRNA in the suprachiasmatic nucleus (Nature,2001). 7.2kb DNA fragment from the 5'upstream of mPer1 gene. mPer1: UAS and GAL 4: GAL 4: GAL 4

项目成果

Yamaguchi S. et al.: "Role of DBP in the circadian oscillatory mechanism"Molecular and Cellular Biology. 20・13. 4773-4781 (2000)

Yamaguchi S.等人：“DBP在昼夜节律振荡机制中的作用”分子和细胞生物学20・13 4773-4781（2000）。

Ishida Y. et al.: "Constitutive expression and delayed light response of casein kinase Iε and Iδ mRNAs in the suprachiasmatic nucleus"Journal of Neuroscience Research. (In press).

Ishida Y. 等人：“视交叉上核中酪蛋白激酶 Iε 和 Iδ mRNA 的组成型表达和延迟光反应”神经科学研究杂志（正在出版）。

Miyake S. et al.: "Phase-dependent responses of Per1 and Per2 genes to a light-stimulus in the suprachiasmatic nuclear of the rat"Neuroscience Letters. 294・1. 41-44 (2000)

Miyake S.等：“大鼠视交叉上核中Per1和Per2基因对光刺激的相位依赖性反应”神经科学快报294·1（2000）。

Yagita K. et al.: "Dimerization and nuclear entry of mPER proteins in mammalian cells"Gene & Development. 14・11. 1353-1363 (2000)

Yagita K.等：“哺乳动物细胞中mPER蛋白的二聚化和核进入”Gene & Development 14・11（2000）。

Yamaguchi S. et al.: "The 5' upstream region of mPerl gene contains two promotors and is responsible for circadian oscillation"Current Biology. 10. 873-876 (2000)

Yamaguchi S. 等人：“mPerl 基因的 5 上游区域包含两个启动子，负责昼夜节律振荡”Current Biology。