神経芽細胞腫のアポトーシス誘導を制御するカスパーゼ8の解析

分析控制神经母细胞瘤细胞凋亡诱导的 caspase 8

• 批准号: 13877296
• 负责人: 桧山 英三
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13877296/
• 关键词: 神経芽細胞腫; カスパーゼ8; メチル化; アポトーシス; マイクロアレイ; 悪性度; CGHアレイ; 分化誘導療法

ヒトカスパーゼ8の上流でメチル化が生じる部位をシークエンスから検索し、bisulfate処理後その部位をメチル化の有無で認識するプライマーを設定して、神経芽腫196例に行ったところ、予後不良の神経芽腫や進行例でメチル化の頻度が有意に高かった(P<0.05)。その部位のオリゴヌクレオチドでメチル化が起こるシトシンを認識するグアニンと、脱メチル化したシトシンをbisulfate処理にてウラシルに変化させた時に相補的に認識するアデニンとしたオリゴヌクレオチドを作製し、メチル化を同定しうるアレイを作製したが、ハイブリ条件が困難で、オリゴヌクレオチドの長さを40塩基程度に延長して再度アレイを作製して検索中である。さらに神経芽細胞腫において欠失、増幅する1番、2番、14番、17番染色体等の領域をカバーする大腸菌人工染色体クローンを用いたアレイでの遺伝子変化の解析では、メチル化のある腫瘍では有意に1番染色体の欠失、14番染色体の増加などの遺伝子量の変化がみられた。これらの検討を、カスパーゼ8上流にメチル化があり、カスパーゼ8発現が低下している6例を、メチル化のない6例と比較検討し、メチル化と有意に相関する遺伝子変化として、1番染色体1p34領域の欠失、2p領域の増加、11q領域の欠失などがみられ、現在、特異的な部位を同定すべく症例を追加して検討中である。ヒト胎児神経細胞由来のcDNAから作製したアレイで、同様の検体の遺伝子発現を検討したが、メチル化のある腫瘍で有意に発現が亢進していたのはMYCN, CyclinG1やNeuron apoptosis inhibitory factorなどで、細胞接着因子やCaspase 8,9などの発現低下を認め、apoptosisの抑制がみられ、これらのシグナル伝達系の遺伝子の動向について現在検討中である。カスペース8のメチル化の検出可能なアレイの開発は可能であり、また、神経芽腫におけるapoptosis誘導シグナル伝達系の解明は分化誘導療法につながると考えられた。

ヒ ト カ ス パ ー ゼ 8 の upper で メ チ ル change が raw じ る parts を シ ー ク エ ン ス か ら 検 し and bisulfate 処 reason after そ の parts を メ チ ル change の presence of で know す る プ ラ イ マ ー を set し て, god 196 cases 経 buds swell に っ た と こ ろ 経 buds swell や, after to adverse の god for example で メ チ ル change の high frequency が intentionally に か っ た (P<0.05). そ の parts の オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド で メ チ ル change since が こ る シ ト シ ン を know す る グ ア ニ ン と, メ チ ル change し た シ ト シ ン を bisulfate 処 Richard に て ウ ラ シ ル に variations change さ せ た に phase when the に know す る ア デ ニ ン と し た オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド を as し, メ チ ル change を be し う る ア レ イ を system し た が, ハ イ ブ リ で the が difficult conditions, オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド の long さ を 40 degree of salt base に extended し て again ア レ イ を cropping し て 検 cable in で あ る. さ ら に god 経 bud cells swollen に お い て owe loss, good picture す る, 1, 2, 14 and 17 times the chromosome の fields such as を カ バ ー す る coliform artificial chromosome ク ロ ー ン を with い た ア レ イ で の heritage 伝 sub - the の parsing で は, メ チ ル change の あ る swollen sores で は intentionally に 1, の owe 14 times chromosomes の raised plus な ど の heritage 伝 child quantity の variations Youdaoplaceholder0. Beg を こ れ ら の 検, カ ス パ ー ゼ 8 high に メ チ ル change が あ り, カ ス パ ー ゼ 8 low 発 now が し て い る を, 6 cases メ チ ル change の な い と beg し 検, 6 cases メ チ ル change と intentionally に phase masato す る heritage 伝 sub - the と し て, 1 chromosome 1 の owe p34 field loss, 2 p areas の raised addition, 11 q の owe lose な ど が み ら れ, now In the specific な site を, determine the すべく case を and add the である て検 treatment である. ヒ ト tire where god 経 cell origin の cDNA か ら cropping し た ア レ イ で, with others in の 検 body の heritage 伝 発 を now son beg し 検 た が, メ チ ル change の あ る swollen sores で intentionally に 発 now が hyperthyroidism し て い た の は MYCN, CyclinG1やNeuron apoptosis inhibitory factorな <s:1> で cell adhesion factor やCaspase Low 8 or 9 な ど の 発 now を confess め, apoptosis の inhibit が み ら れ, こ れ ら の シ グ ナ ル 伝 da is の heritage 伝 son の trend に つ い て now 検 please で あ る. カ ス ペ ー ス 8 の メ チ ル change の 検 makes possible な ア レ イ の open 発 は may で あ り, ま た, god 経 buds swell に お け る apoptosis induced シ グ ナ ル 伝 da is の interpret は induction differentiation therapy に つ な が る と exam え ら れ た.

项目成果

檜山英三, 他: "マイクロアレイ法によるサイトカインプロフィール解析"侵襲と免疫. (in press). (2002)

Eizo Hiyama 等人：“使用微阵列方法进行细胞因子谱分析”《入侵与免疫》（出版中）。

Hiyama E. et al.: "Immunohistocheical detection of telomerase (hTERT) in human cancer tissues and a subset of cells in normal tissues"Neoplasia. 3・1. 17-26 (2001)

Hiyama E.等人：“人类癌组织和正常组织细胞亚群中端粒酶（hTERT）的免疫组织化学检测”Neoplasia 3・1（2001）。

Hiyama E., et al.: "Biological characteristics of neuroblastoma with partial deletion in the short arm of chromosome 1,"Medical and Pediastric Oncology. 36・1. 67-71 (2001)

Hiyama E.等人：“1号染色体短臂部分缺失的神经母细胞瘤的生物学特征”，《医学和儿科肿瘤学》36·1（2001）。

Ikeda H., et al.: "Experience with International Neurobastoma Staging System and Pathology Classification"British Journal of Cancer. (in press). (2002)

Ikeda H.等人：“国际神经母细胞瘤分期系统和病理学分类的经验”英国癌症杂志。

山岡裕明, 他: "肺転移を有する肝芽腫に対する治療戦略"日本外科系連合学会誌. 26・5. 1317-1323 (2001)

Hiroaki Yamaoka等：“肝母细胞瘤肺转移的治疗策略”日本外科联合会杂志26・5 1317-1323（2001年）。