認識・機能誘導型微粒子系の構築と人工血小板への応用

识别/功能诱导微粒系统的构建及其在人工血小板中的应用

• 批准号: 02J03366
• 负责人: 寺村 裕治
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Osaka University (2004)Waseda University (2002-2003)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J03366/
• 关键词: 人工血小板; 一分子計測; 膜蛋白質; 人工血液; 動力学; 止血能; アルブミン; リン脂質小胞体(リポソーム); コラーゲン; 血小板; 人工血小板(血小板代替物); 分子集合体; 薬物送達系; 血小板膜蛋白質; 薬物運搬系

遺伝子組換えヒト血清アルブミンを水中でジスルフィド重合させたアルブミン微粒子あるいはリン脂質小胞体(リポソーム)の表面に,血小板膜蛋白質(GPIbα、GPIa/IIa)の遺伝子組換え体(rGPIbα、rGPIa/IIa)あるいはフィブリノーゲン関連ペプチドを結合させ、止血能を有する人工血小板(血小板代替物)の開発から機能評価を展開している。本年度では、フィブリノーゲンγ鎖アミノ酸配列400-411番目のドデカペプチド(H12)を担持したアルブミン微粒子の止血能に関して、まず流動下において出血部位モデル基板への機能評価(in vitro法)を行い、さらに血小板数減少症ラットを用いた動物実験からその止血能評価を行った。H12担持アルブミン微粒子では、血液流動下において出血部位モデル基板への特異的粘着が確認でき、ずり速度の低い領域で粘着能が高いことを確認した。特に、活性化した血小板と特異的に凝集塊を形成することから、一次止血よりも二次止血を促進することが確認できた。また、H12担持アルブミン微粒子のin vivo系での止血能評価を行なうために、抗癌剤ブスルファンを投与して血小板数を減少させたラット(血小板減少症ラット)を作製し、尻尾切断部位からの出血時間を測定する系(in vivo法)を確立した。正常値のおよそ5分の1に血小板数が減少したラットにH12担持アルブミン微粒子を投与し、尻尾切断部位からの出血時間を測定したところ、H12を担持していないアルブミン微粒子投与群と比較して、出血時間がおよそ2分の1まで最大で短縮することを確認した。投与量の増加に伴い、出血時間が短縮することも確認した。以上より、認識部位として血小板膜蛋白質やフィブリノーゲン関連ペプチドを利用し、アルブミン微粒子やリポソームを担体とした微粒子は、止血能を有する人工血小板として機能することを明らかにした。

A functional evaluation of platelet membrane proteins (GPIbα, GPIa/IIa) and their daughter components (rGPIb α, rGPIa/IIa) on the surface of lipid vesicles was carried out. This year, we carried out functional evaluation (in vitro method) on bleeding sites of micro-particles under flow conditions, and conducted hemostatic evaluation on thrombocytopenia in animals using the method of "blood platelet count reduction." H12 supports fine particles, blood flow, bleeding site, substrate specific adhesion, low speed, high adhesion energy. Platelet specific aggregation is confirmed by primary hemostasis. To establish a system for the determination of bleeding time at the site of distal incision (in vivo method). When the platelet count was reduced to less than 1/5 of the normal value, H12-supported albumin microparticles were administered, and the bleeding time at the hip and tail incision site was measured. It was confirmed that the bleeding time was shortened to less than 12 of the normal value when H12-supported albumin microparticles were administered. Increase in dosage, shortening of bleeding time and confirmation The function of platelet membrane protein and its association with platelet function are discussed in detail.

项目成果

Teramura, Y., et al.: "Roling properties of rGPIbα-conjugated phospholipid vesicles on vWf surface under flow conditions with different membrane fluidity"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 296. 765-770 (2002)

Teramura，Y.，等人：“不同膜流动性的流动条件下 rGPIbα 缀合的磷脂囊泡的滚动特性”Biochem. Commun. 296. 765-770 (2002)

Teramura, Y., et al.: "Prolonged oxygen-carrying ability of hemoglobin vesicles by coencapsulation of catalase in vivo"Bioconjugate Chem.. 14. 1171-1176 (2003)

Teramura, Y., 等人：“通过体内过氧化氢酶的共封装延长血红蛋白囊泡的携氧能力”Bioconjugate Chem.. 14. 1171-1176 (2003)

Teramura, Y., et al.: "The effect of encapsulation of Hb with vesicles against H_2O_2 reaction and lipid peroxidation"Bioconjugate Chem.. 13. 1302-1308 (2002)

Teramura, Y., et al.：“囊泡封装 Hb 对 H_2O_2 反应和脂质过氧化的影响”Bioconjugate Chem.. 13. 1302-1308 (2002)

Hemostatic effects of fibrinogen γ -chain dodecapeptide conjugated polymerized albumin particles in vitro and in vivo

纤维蛋白原γ链十二肽缀合聚合白蛋白颗粒的体内外止血作用

• 发表时间: 2005
• 期刊: Transfusion 45
• 作者: Yosuke Okamura;Shinji Takeoka;Yuji Teramura;Hitomi Maruyama;Eishun Tsuchida;Makoto Handa;Yasuo Ikeda
• 通讯作者: Yasuo Ikeda

Teramura, Y., et al.: "Function of fibrinogen γ-chain dodecapeptide-conjugated latex beads under flow"Biochem.BIophys.Res.Commun.. 312. 773-779 (2003)

Teramura，Y.，等人：“流动下纤维蛋白原 γ-链十二肽缀合乳胶珠的功能”Biochem.BIophys.Res.Commun.. 312. 773-779 (2003)