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新しい一分子計測法による蛋白質の折り畳みダイナミクス

新しい一分子計測法による蛋白質の折り畳みダイナミクス
使用新的单分子测量方法的蛋白质折叠动力学
批准号：
16041228
负责人：
高橋 聡
金额：
$7.87万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
2004 至 2005
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16041228/
关键词：
蛋白質折り畳み一分子観察シトクロムc溶液混合装置構造変化蛍光観察

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项目成果

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蛋白質の折り畳みダイナミクスを一分子レベルで観察する新しい手法を開発し、シトクロムcなどの折り畳み過程を解析することが本研究の目的である。本年度は、実験装置の開発とデータ取得条件の最適化を検討した。1)一分子蛍光観測用光学システムの開発:一分子観測のためのシステムとして、レーザーとイメージインテンシファイアー、CCDカメラによる系を構築した。また、レーザー光を変調することでデータに時間マーカーを入れるためのEO変調素子を導入した。以上の開発により、一分子の蛍光トレースを観測することが可能になった。2)一分子の蛍光観察のための「さや流セル」の開発:一分子レベルの試料を扱うためには、フローセル内面に試料が吸着を起こさずに、一定流速で流れることが必要だった。そのために、セルの中心部分にのみ試料を流すためのさや流セルを開発した。今年度は、ベイバイオサイエンス社(神戸)に依頼し、セルソーターに使われるさや流セルを、特別に我々の実験目的に合うようにデザインした。このセルを用いることで、試料の吸着などの問題をある程度回避できるようになった。3)平衡条件下における折り畳み過程の一分子観測:蛍光ラベルしたシトクロムcを用いて、平衡条件下で折り畳み転移の観察を行った。得られた一分子の蛍光トレースは、様々な強度の間を比較的ゆっくりと行き来した。蛍光強度の頻度分布を計算したところ、集団変性観察から推定されたN、I、U状態に対応する三つのピークが確認された。ピーク分布のグアニジン濃度依存性も、分子集団観察の結果と一致した。従って、今回観察された蛍光強度トレースは、ラベル化試料の特性を正しく反映すると推論できた。以上のように、本研究を行うことで、我々は一分子の蛍光観察にはじめて成功したと考えている。
期刊论文(15)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
NMR characterization of refolding of β2-microglobulin trapped by prolyl cis-trans isomerization.
脯氨酰顺反异构化捕获的 β2-微球蛋白重折叠的 NMR 表征。
DOI： --
发表时间： 2005
期刊： J.Mol.Biol. 348(2)
影响因子： --
作者： [Kameda, A.]
通讯作者： A.
Stereospecific amyloid fibril formation of a peptide fragment of β2-microglobulin.
β2-微球蛋白肽片段的立体特异性淀粉样原纤维形成。
DOI： --
发表时间： 2005
期刊： Biochemistry 44(1)
影响因子： --
作者： [Wadai, H.]
通讯作者： H.
A bsence of a detectable intermediate in the compound I formation of horseradish peroxidase at ambient temperature
环境温度下辣根过氧化物酶形成化合物 I 时不存在可检测的中间体
DOI： --
发表时间： 2005
期刊： J. Biol. Chem. 280
影响因子： --
作者： [Shintaku, M.]
通讯作者： M.
Steric effects of isoleucine 107 on heme reorientation reaction in human myoglobin.
异亮氨酸 107 对人肌红蛋白血红素重定向反应的空间效应。
DOI： --
发表时间： 2004
期刊： Biochem.Biophys.Res.Commun. 324
影响因子： --
作者： [Haruto, Ishikawa et al.]
通讯作者： Ishikawa et al.
共 11 条
    2.5億年前の大量絶滅期、古太平洋遠洋域の海洋最上部は無酸素化したか？
    • 批准号：
      23K25983
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $5.24万
    • 财政年份：
      2024
    • 负责人：
      高橋 聡
    • 依托单位：
      Nagoya University
    新型コロナウィルスgRNAの構造形成：gRNAのフォールディング仮説の証明と展開
    • 批准号：
      24K01983
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $11.81万
    • 财政年份：
      2024
    • 负责人：
      高橋 聡
    • 依托单位：
      Tohoku University
    Study of photo-induced phase transitions in strongly correlated systems by extraction of important degrees of freedom using randomized singular value decomposition
    • 批准号：
      23K03281
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
    • 资助金额：
      $2.91万
    • 财政年份：
      2023
    • 负责人：
      高橋 聡
    • 依托单位：
      Nagoya Institute of Technology
    2.5億年前の大量絶滅期、古太平洋遠洋域の海洋最上部は無酸素化したか？
    • 批准号：
      23H01287
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
    • 资助金额：
      $12.31万
    • 财政年份：
      2023
    • 负责人：
      高橋 聡
    • 依托单位：
      Nagoya University
    海外基金