ヒトヨタケ培養液を用いたフェノール系内分泌攪乱物質除去システムの開発

开发利用茧菇培养液去除酚类内分泌干扰物的系统

• 批准号: 13750732
• 负责人: 櫻井 明彦
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: University of Fukui
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13750732/
• 关键词: 内分泌攪乱物質; ペルオキシダーゼ; 重合沈殿除去; ヒトヨタケ; フェノール類; 内分泌撹乱物質

はじめに回転円板型培養器を用いてヒトヨタケ(Coprinus cinereus)によるペルオキシダーゼ生産を行った。円板枚数と培養液の体積を変化させて、微生物膜の比表面積(微生物膜の面積/培養液の体積)とペルオキシダーゼ生産性の関係について検討したところ、最大ペルオキシダーゼ活性は、比表面積2〜4.5の範囲でほぼ一定となった。また、生産速度は3〜4.5で最も高い値となった。これらの結果から、比表面積を3.5付近に設定した場合に最も高い生産性が得られることが明らかとなった。次に、培養液の入れ替えによる反復回分培養を行ったところ、少なくとも培養液の入れ替え6回目まで高い生産性を維持できることが分かった。なお、反復回分培養での生産性は、既報の文献値と比較して最高レベルであった。次に、ヒトヨタケにより生産したペルオキシダーゼ(培養液)を用いてノニルフェノールの除去について検討した。ノニルフェノールに対する過酸化水素の添加量について検討したところ、モル比で7付近が最適であることが明らかとなった。この値は、フェノール(最適モル比1付近)やビスフェノールA(最適モル比2付近)に比べて著しく大きく、反応機構が異なることが予想された。最適反応温度は、25〜40℃であったが、0〜60℃の範囲では安定した除去率が得られた。pHについては、7付近が最適であり、酸性領域やアルカリ性領域では著しく除去率が低下した。反応後の溶液の急性毒性、エストロゲン様活性について測定したところ、反応前に比べて高い毒性やエストロゲン様活性は検出されなかった。この結果から、ペルオキシダーゼによる反応では有害な物質は生成していないと考えられる。また、反応中間体や生成物についてLC/MSとGC/MSを用いて測定したが、反応生成物の濃度が非常に低いため特定することはできなかった。

は じ め に back planning has drifted back towards &yen; plate type incubators を with い て ヒ ト ヨ タ ケ (Coprinus cinereus) に よ る ペ ル オ キ シ ダ ー ゼ production line を っ た. Has drifted back towards &yen; plate number を の と broth volume variations change さ せ て, microbial membrane の specific surface area (microbial membrane の area の / broth volume) と ペ ル オ キ シ ダ ー ゼ productive の masato is に つ い て beg し 検 た と こ ろ, maximum ペ ル オ キ シ ダ ー は ゼ activity, specific surface area of 2 ~ 4.5 の van 囲 で ほ ぼ certain と な っ た. Youdaoplaceholder0, production speed また 3 to 4.5で the highest <s:1> value となった. こ れ ら の results か ら, specific surface area 3.5 paying nearly に を setting し た occasions に も most high い productive が ら れ る こ と が Ming ら か と な っ た. の に, broth into れ for え に よ る repeatedly points back line cultivate を っ た と こ ろ, less な く と の も broth into れ for え 6 pa2 ま で い productive を maintain high で き る こ と が points か っ た. Youdaoplaceholder0, repeated backscore cultivation of で, production of で, and comparison of reported <s:1> literature values と showed that て て was the highest and レベ であった であった であった. に, ヒ ト ヨ タ ケ に よ り production し た ペ ル オ キ シ ダ ー ゼ (culture) を い て ノ ニ ル フ ェ ノ ー ル の remove に つ い て beg し 検 た. ノ ニ ル フ ェ ノ ー ル に す seaborne る acidification passes water element の amount に つ い て beg し 検 た と こ ろ, モ ル than で pay nearly 7 が optimum で あ る こ と が Ming ら か と な っ た. こ の numerical は, フ ェ ノ ー ル (optimum モ ル is closer than 1 pay) や ビ ス フ ェ ノ ー ル A (optimum モ ル than paying nearly 2) に than べ て in し く big き く, anti 応 institutions が different な る こ と が to think さ れ た. The optimal reaction temperature is 応, 25-40℃であったが, 0-60℃ <s:1> range 囲で, <s:1> stability た, and the removal rate が is られた. PH に つ い て は, 7 pay nearly が optimal で あ り や, acid field ア ル カ リ sex field で は the し く removal rate low が し た. Anti 応 の の solution after acute toxicity, エ ス ト ロ ゲ ン others active に つ い て determination し た と こ ろ, anti 応 に before than べ て high toxic や い エ ス ト ロ ゲ ン others active は 検 out さ れ な か っ た. こ の results か ら, ペ ル オ キ シ ダ ー ゼ に よ る anti 応 で は は な harmful substances generated し て い な い と exam え ら れ る. ま た や, anti 応 intermediates products に つ い て LC/MS と GC/MS を い て determination し た が, anti 応 products が の concentration is very low に い た め specific す る こ と は で き な か っ た.

项目成果

A.Sakurai, S.Kawamoto, J.F.Abarca, M.Sakakibara: "Peroxidase production by Coprinus cinereus using rotating disk contactor"Biochemical Engineering Journal. 10. 47-53 (2002)

A.Sakurai、S.Kawamoto、J.F.Abarca、M.Sakakibara：“使用转盘接触器通过灰盖鬼伞生产过氧化物酶”生物化学工程杂志。

A.Sakurai, S.Toyoda, M.Sakakibara: "Removal of bisphenol A by polymerization and precipitation method using Coprinuc cinereus peroxidase"Biotechnology Letters. 23. 995-998 (2001)

A.Sakurai、S.Toyoda、M.Sakakibara：“使用灰盖鬼伞过氧化物酶通过聚合和沉淀法去除双酚 A”生物技术快报。