骨髄血投与による肝臓リモデリングの基礎的検討

骨髓输血肝重塑的基础研究

• 批准号: 13770262
• 负责人: 寺井 崇二
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770262/
• 关键词: 肝幹細胞; 骨髄細胞; 再生医療; モデル; 可塑性; GFP蛋白

平成13年度までの研究にてGreen Fluorescent Protein (GFP)トランスジェニックマウスを用い骨髄細胞からの肝細胞への分化増殖のin vivo評価モデルを世界に先駆け開発した(GFP/CCl4モデル)。このモデルにおいては,持続的な四塩化炭素(CCl4)投与による肝障害時に,骨髄細胞から肝細胞への分化・増殖が確認され,骨髄細胞投与後,肝臓内の骨髄細胞は25%まで増加し,肝細胞索構造を構築した(特願2001-271240号)。この研究成果については2年1回開かれる2002 FASEB Summer Research Conference"Mechanism of liver growth, differentiation and molecular pathogenesis of hepatic diseaseにて招待講演を行った。さらにこのモデルの解析の結果、骨髄細胞投与により、血清アルブミン値の回復、生存率も有意に骨髄細胞の非投与群に比べ有意差を持って改善していた。最近問題になっている、この分化転換において細胞融合の関与は少ないと考えられた。また肝線維化も有意に改善していた(この結果については2002年度アメリカ肝臓病学会総会プレナリーセッション口頭発表)。これらの結果より考え、自己骨髄細胞を用いた肝臓再生療法は臨床応用可能な次世代の移植医療になりえると考えられた。さらに東京大学薬学系研究科生理化学教室の仁科博史博士との共同研究にて、胎児肝特異的な分子マーカーを単離する目的で、胎生期11.5日(E11.5)のマウス肝を抗原にして複数のモノクローナル抗体を作製して解析してきた。このうち抗Liv2と命名した抗体は、マウス発生期に出現する肝幹細胞である肝芽細胞を特異的に認識する。このLiv2陽性細胞は骨髄差wartの肝細胞への分化過程にて出現する。また抗Liv2抗体作成時、同時に作成した抗Liv8抗体は、大動脈・生殖隆起・中腎(AGM)領域の血管内皮細胞や胎児肝領域に流入する血液幹細胞に加え、成体骨髄中の細胞も認識することから、胎児肝における二次(成体型)造血や成体の造血の場である骨髄を解析する有用なツールになることが期待されている(第25回日本分生物学会ワークショップにて口頭発表)。我々は骨髄中に存在する肝幹細胞の同定のため、あらたに作成したLiv8抗体を解析した。この結果Liv8陽性、陰性細胞の移植では、陰性群において高率に肝細胞への分化転換が確認でき、この結果より骨髄中のLiv8陰性細胞群が再生療法に有用な細胞群と考えられた。

In 2013, the Green Fluorescent Protein (GFP) was first developed in the world for the development of differentiation and proliferation of hepatocytes in vivo using bone marrow cells. In response to liver injury caused by the administration of carbon tetrachloride (CC14), differentiation and proliferation of hepatocytes were confirmed. After the administration of osteoblasts, osteoblasts in the liver increased by 25%, and the structure of hepatocytes was constructed (Japanese Patent Application No. 2001-271240). The results of this research were presented at the 2002 FASEB Summer Research Conference"Mechanism of liver growth, differentiation and molecular pathogenesis of hepatic disease." The results of analysis of the results, bone marrow cell injection, serum recovery, survival rate, intentional bone marrow cell injection and non-intentional bone marrow cell injection continued to improve. Recent problems include cell fusion and differentiation. The liver maintenance was intentionally improved (the results were presented orally at the 2002 Annual Meeting of the Society of Liver Diseases). The results show that liver regeneration therapy can be used in the next generation of transplantation. In collaboration with Dr. Hiroyuki Hitoshi, Department of Physiology and Chemistry, University of Tokyo, the aim of molecular identification of fetal liver is to analyze the production of fetal liver antigens on the 11.5th day of gestation (E11.5). Anti-Liv 2 antibodies are specifically identified in liver stem cells and liver bud cells. These Liv2 positive cells are involved in the differentiation process of hepatocytes. Anti-Liv2 antibody is produced simultaneously with anti-Liv8 antibody production, including vascular endothelial cells in the arteries, reproductive processes, mesonephros (AGM), blood stem cells in the fetal liver, and adult bone marrow. Fetal liver secondary hematopoiesis and adult hematopoiesis analysis are expected to be completed (25th Japanese Society of Molecular Biology). The liver stem cells were isolated from the bone marrow and analyzed by Liv8 antibody. The results showed that Liv8 positive and negative cells were transplanted and negative cells were transplanted. The high rate of differentiation of hepatocytes was confirmed. The results showed that Liv8 negative cells in bone marrow were useful for regenerative therapy.

项目成果

Shuji Terai: "New cell therapy using bone marrow cell to repair damaged liver"J Gastroenterology. 37(SupplXIV). 162-163 (2002)

Shuji Terai：“利用骨髓细胞修复受损肝脏的新细胞疗法”J Gastroenterology。

Shuji Terai: "Growth, Proliferation and Apoptosis in Hepatocyte"Springer Verlag. 9 (2001)

Shuji Terai：“肝细胞的生长、增殖和凋亡”施普林格出版社。

Hitoshi Shirahashi: "Ubiquitin is a possible new predictive marker for the recurrence of human hepatocellular carcinoma"Liver. 22-5. 413-418 (2002)

Hitoshi Shirahashi：“泛素可能是人类肝细胞癌复发的新预测标记物”肝脏。

Naoki Yamamoto: "Liv8 mAb: A new murine monoclonal antibody separate hepatic stem cell population in bone marrow"Hepatology. 36-4. 200-200 (2002)

Naoki Yamamoto：“Liv8 mAb：一种新型鼠单克隆抗体，可分离骨髓中的肝干细胞群”肝病学。