アデノ随伴ウイルスベクターを用いた動脈硬化に対する遺伝子治療の試み

使用腺相关病毒载体进行动脉硬化基因治疗的尝试

• 批准号: 13770359
• 负责人: 前田 喜一
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770359/
• 关键词: アデノ随伴ウイルス; 遺伝子治療; 動脈硬化

AAV-IL-10を作成し、C2C12 cell(mouse myoblast)に遺伝子導入を行った。遺伝子導入後の培養液中のIL-10濃度はベクター用量依存性に上昇した。また,感染48時間後で7.54ng/ml、感染5日後で32.0ng/mlであり,持続的かつ増加傾向がみられた。産生されたIL-10の生理的活性を検討するために,LPS刺激によるJ774 cell(mouse macrophage)におけるIL-6産生能を検討した。AAV-IL-10導入C2C12の培養上清での前処置でIL-6産生は有意に抑制され、この抑制作用は、IL-10中和抗体存在下では消失した。このことより遺伝子導入により産生されたIL-10は、炎症性サイトカインの産生を抑制することが,確認された。アポE knockout mouseに高コレステロール食を負荷し,マウスの上行大動脈を摘出後,Oil red染色にて動脈硬化の進展を検討した。高コレステロール食負荷2ヵ月目には,血中コレステロール値の増加と共に,明らかな動脈硬化病変を検出することができた。次にアポE knock out mouseの前脛骨筋にAAV-IL-10を筋肉注射にて導入し、血中IL-10濃度を測定した。IL-10導入マウスでは、ベクターの用量依存性に血中IL-10濃度は増加し、AAV-IL-10 1X10E13particle導入マウスでは、13.35,15.26ng/ml(遺伝子導入2week,4week後)であった。以上より,in vivoにおいてもAAV-IL-10による遺伝子導入が,成功しており,その遺伝子発現が持続的であることが確認できた。現在,遺伝子導入マウスの動脈硬化に対する影響を,組織学的に検討しているところであるが,プレリミナリーなデータでは,動脈硬化抑制作用があるようである。同時に,血中の炎症性サイトカインの濃度についても検討中である。

AAV-IL-10 is ready to be made, and C2C12 cell (mouse myoblast) is required to enter the line. After being introduced into the culture solution, the concentration of IL-10 in the culture solution is dependent on the dosage. 7.54ng/ml after 48 hours of infection and 32.0ng/ml infection after 5 days of infection. The physiological activity of IL-10 was stimulated by LPS. J774 cell (mouse macrophage) was stimulated by IL-6. The supernatant of AAV-IL-10 was injected into C2C12 and the supernatant was pretreated with IL-6. It intentionally suppressed, suppressed, and disappeared in the presence of IL-10 neutralizing antibody. Please make sure that your child is suffering from IL-10, inflammatory disease, inhibition and confirmation of symptoms. After the E knockout mouse was removed, Oil red staining was performed to detect the progression of kinetic hardening. The symptoms of hyperlipidemia are as follows: the eyes of the lunar month, the amount of food in the blood, the amount of food in the blood, the symptoms of animal sclerosis, the symptoms of animal sclerosis. Before the second E knock out mouse, the bone tendons and AAV-IL-10 muscles were injected into the muscle, and the blood IL-10 was measured. IL-10 was added to blood in a dose-dependent manner, IL-10 was added to blood in a dose-dependent manner, AAV-IL-10 1X10E13particle was added to blood in a dose-dependent manner, and 13.35 was added to 15.26 ng