BCL6及びその関連遺伝子BAZFの血球分化における機能解析

BCL6及其相关基因BAZF在血细胞分化中的功能分析

• 批准号: 13770576
• 负责人: 福田 哲也
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770576/
• 关键词: BCL6; BAZF; 悪性リンパ腫; ユビキチン; SIAH-1; MAPキナーゼ; 転写調節

マウスBAZF遺伝子をプローブとしてヒトBAZF遺伝子のクローニングを行った。ヒトBAZF遺伝子は9つのエクソンからなり、1443bpのopen reading frameを持ち、480のアミノ酸をコードすると考えられた。アミノ酸レベルでヒトとマウスは91%の相同性を持ち非常に保存された遺伝子であった。機能ドメインと考えられるBTB/POZドメイン、zinc fingerドメインはほぼ完全に一致しており、機能的にも保存されていると考えられた。FISH解析によりこの遺伝子は染色体17p13.1に位置することが明らかとなった。BAZFの発現をノーザンブロットにて解析した結果、ヒト組織でubiquitousな発現が認められ、特に心臓と胎盤にて強い発現が認められた。細胞株においては未熟B細胞株と赤白血病株にて発現が認められた。赤白血病株(HEL)にフォーボルエステルを加えると巨核球への分化が誘導されることが知られているが、この系においてBAZFが発現増強されることが明らかとなった。これらのことからBAZFはB細胞の初期分化や巨核球分化などBCL6と異なるstage、系列においてBCL6のように分化の制御を行っていると考えられる。さらに今回BCL6がリングフィンガー蛋白であるSIAH-1と結合することを見いだした。SIAH-1はE3ユビキチン蛋白結合酵素として知られている。In vitroで合成したBCL6はSIAH-1-GST融合蛋白と結合し、この結合にはBCL6の中央部位とSIAH-1のC末端が関与していた。遺伝子導入した細胞株に置いてもこの二つの因子の結合が確認された。SIAH-1との共発現によりBCL6蛋白の発現は減弱し、この効果はプロテアソーム阻害剤で抑えられることより、SIAH-1がBCL6のユビキチン化とそれに引き続く蛋白分解を司ることが判明した。BCL6はMAP kinaseの活性化に伴いリン酸化とそれに引き続くユビキチンかが起こると報告されているが、SIAH-1との結合とその後の分解はMAP kinaseによるリン酸化が起きないとされる変異体蛋白でも起こり、この機構に必ずしもMAP kinaseの関与は必要ないと考えられた。

マ ウ ス BAZF posthumous son 伝 を プ ロ ー ブ と し て ヒ ト BAZF posthumous son 伝 の ク ロ ー ニ ン グ を line っ た. ヒ ト BAZF posthumous son 伝 は 9 つ の エ ク ソ ン か ら な り, 1443 bp の open reading frame を ち, 480 の ア ミ ノ acid を コ ー ド す る と exam え ら れ た. ア ミ ノ acid レ ベ ル で ヒ ト と マ ウ ス は 91% gay を hold ち の phase very に save さ れ た posthumous son 伝 で あ っ た. Functional ド メ イ ン と exam え ら れ る BTB/POZ ド メ イ ン, any zinc finger ド メ イ ン は ほ ぼ に completely consistent し て お り, functional に も save さ れ て い る と exam え ら れ た. FISH analysis: によ 伝 伝 cultural heritage 伝 伝 chromosome 17p13.1に position する とが とが light ら ら となった となった. BAZF の 発 now を ノ ー ザ ン ブ ロ ッ ト に て parsing し た results, ヒ ト organization で ubiquitous な 発 が now recognize め ら れ, crucial に heart と placenta に て strong い 発 が now recognize め ら れ た. The cell lines にお にお て て て immature B cell line と leukemia cell line にて occurrence が recognition められた. Red leukemia (HEL) strains に フ ォ ー ボ ル エ ス テ ル を plus え る と giant nuclear ball へ が の differentiation inducing さ れ る こ と が know ら れ て い る が, こ の is に お い て BAZF が 発 now raised strong さ れ る こ と が Ming ら か と な っ た. こ れ ら の こ と か ら BAZF は B cells early の や giant nuclear ball differentiation な ど BCL6 と different な る stage, series に お い て BCL6 の よ う に differentiation の suppression を line っ て い る と exam え ら れ る. さ ら に today back BCL6 が リ ン グ フ ィ ン ガ ー protein で あ る と SIAH - 1 combined す る こ と を see い だ し た. SIAH-1 ユビキチ E3ユビキチ <s:1> protein-binding enzyme と て て know られて る る る. In vitroで synthesizes the <s:1> たBCL6 <s:1> SIAH-1-GST fusion protein と binds to <s:1>, <s:1> binds to に <s:1> BCL6 <s:1> central part とSIAH-1 <e:1> c-terminal が and て て た た た た. The 伝 seed was introduced into the た cell line に, and the <s:1> て <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <e:1> combined with が to confirm された. SIAH - 1 と の 発 now total に よ り BCL6 protein の 発 は abate し, こ の unseen fruit は プ ロ テ ア ソ ー ム resistance against tonic で え suppression ら れ る こ と よ り, SIAH - 1 が BCL6 の ユ ビ キ チ ン change と そ れ に lead き 続 く protein decomposition を department る こ と が.at し た. BCL6 は MAP kinase の activeness に with い リ ン acidification と そ れ に lead き 続 く ユ ビ キ チ ン か が up こ る と report さ れ て い る が, SIAH - 1 と の combining と そ の は の after decomposition MAP Kinase に よ る リ ン acidification が up き な い と さ れ る - foreign proteins で も up こ り, こ の institutions に will ず し も MAP kinase の masato and は necessary な い と exam え ら れ た.

项目成果

Sakashita C, Fukuda T, et al.: "Cloning and characterization of the human BAZF gene, a homologue of the BCL6 oncogene"Biochemical and Biophysical Research Communications. 291-3. 567-573 (2002)

Sakashita C、Fukuda T 等人：“人类 BAZF 基因（BCL6 癌基因的同源物）的克隆和表征”生物化学和生物物理研究通讯。

Arima M, Toyama H, Ichii H, Kojima S, Okada S, Hatano M, Cheng G, Kubo M, Fukuda T, Tokuhisa T.: "A putative silencer element in the IL-5 gene recognized by Bcl6"Journal of Immunology. 169(2). 829-836 (2002)

Arima M、Toyama H、Ichii H、Kojima S、Okada S、Hatano M、Cheng G、Kubo M、Fukuda T、Tokuhisa T.：“Bcl6 识别的 IL-5 基因中的推定沉默元件”免疫学杂志。

Sakashita C, Fukuda T, Okabe S, Kobayashi H, Hirosawa S, Tokuhisa T, Miyasaka N, Miura O, Miki T: "Cloning and characterization of the human BAZF gene, a homologue of the BCL6 oncogene"Oncogene. 291(3). 567-573 (2002)

Sakashita C、Fukuda T、Okabe S、Kobayashi H、Hirosawa S、Tokuhisa T、Miyasaka N、Miura O、Miki T：“人类 BAZF 基因（BCL6 癌基因的同源物）的克隆和表征”癌基因。