放射線誘発アポトーシスにおけるp41機能の研究

p41在辐射诱导细胞凋亡中的功能研究

基本信息

批准号：
14770447
负责人：
森田明典
金额：
$ 2.5万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

アポトーシスにおけるp41の検出は、これまでヒトの培養細胞に限られていたが、マウスpro-B細胞株Ba/F3細胞やマウス乳ガン細胞株FM3Aを主に用い、作成したp41特異的抗体がヒトだけでなくマウスアポトーシスの検出にも有用であることが明らかとなった。このp41を指標とし、X線照射直後のMOLT-4細胞の培養液中に種々の薬剤を加え、p41誘導阻害効果を検討、カスペース阻害剤の他に、チロシンホスファターゼ阻害剤として広く用いられているオルトバナジン酸ナトリウム(Na_3VO_4、Valladate、以後バナデート)をp41誘導阻害剤として見出し、実験を進めた結果、バナデートは直接のカスペース活性阻害効果は認められなかったが、バナデート処理した照射細胞のカスペース活性化を抑えることによってp41誘導を阻害していた。更にバナデートは、放射線や抗癌剤によるアポトーシスを抑制し、他の幾つかの刺激によるアポトーシスは抑制しなかったことから、DNA損傷が引き起こすアポトーシス経路を主として抑制していると考えられた。次に、カスペース阻害剤処理、及びBc1-2過剰発現と比較しながらカスペース活性化の上流反応に対する効果を検討したところ、シトクロムc、Smac/DIABLのミトコンドリアからの放出は3条件とも抑制したが、更に早期のアポトーシス過程であるミトコンドリア膜電位低下やBax構造変化はカスペース阻害剤では抑制されず、バナデート、Bc1-2で抑制された。これらの結果から、MOLT-4放射線誘発アポトーシスの各過程に対するバナデートの抗アポトーシス作用は、Bc1-2過剰発現によって得られる効果によく似ており、カスペース阻害剤とは異なることが示された。ミトコンドリアの上流に位置するアポトーシス過程にバナデートは作用しているものと考えられ、現在、その上流過程の特定を進めている(投稿準備中)。

直到现在，凋亡中p41的检测一直限于人类培养的细胞，但已经发现，主要使用小鼠Pro-B细胞系BA/F3细胞和小鼠乳腺癌细胞系FM3A产生的P41特异性抗体不仅对人有用，而且可用于检测小鼠的凋亡。使用该p41作为指数，在X射线照射后立即将各种药物添加到Molt-4细胞的培养基中，并研究了P41诱导的作用。除CASPACE抑制剂外，邻苯二甲酸钠（Na_3vo_4，Valladate，以下称为钒酸盐），被广泛用作酪氨酸磷酸酶抑制剂，被发现是P41诱导抑制剂。实验的结果是，钒酸盐并未直接抑制CASPACE活性，而是通过抑制P41的诱导，通过抑制钒酸盐处理的辐照细胞中的CASPACE激活。此外，钒酸盐抑制了由辐射和抗癌药引起的凋亡，并且没有抑制其他几种刺激引起的凋亡，并且被认为主要抑制由DNA损伤引起的凋亡。接下来，当我们调查与木姐抑制剂的处理和BC1-2的过表达相比，当我们发现细胞色素c和线粒体中的Smac/diabl的释放时，在所有三个条件下抑制了细胞色素c和smac/diabl的影响，而是通过抑制骨膜的早期变化是偶然的结构变化，而不是线粒体的早期抑制，但smac/diabl的影响是，我们发现细胞色素c和smac/diabl的释放均未抑制。由钒酸盐和BC1-2。这些结果表明，钒酸盐对MOLT-4辐射诱导的凋亡的每个过程的抗凋亡作用与BC1-2过表达获得的抗凋亡作用非常相似，并且与CASPACE抑制剂不同。据认为，钒酸盐正在作用于线粒体上游的凋亡过程，目前正在努力识别其上游过程（准备发布）。