進行性腎細胞癌に対する樹状細胞を用いた免疫療法

使用树突状细胞治疗晚期肾细胞癌的免疫疗法

• 批准号: 14770822
• 负责人: 三浦 一郎
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Kyorin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770822/
• 关键词: 腎細胞癌; 樹状細胞; 免疫療法

患者よりヘパリン加採血管で約50-400mlの採血を行い、フィコール比重遠心法で末梢血単核球を分離した。磁気細胞分離システム(Blood Dendritic cell Isolation Kit ; Miltenyi Biotech GmbH)を使用し、negative selectionで樹状細胞分画を分離。10%患者血清添加RPM1培地で2時間CO2インキュベーター培養後、plate非付着細胞は取り除き付着細胞を樹状細胞前駆細胞としIL-4(1000U/ML ; Cell Genix),GM-CSF(1000U/ml ; Leukomax ; Novartis)を添加し5日間培養し、未成熟樹状細胞を精製した。患者の癌細胞を手術の際に無菌下に摘出しておき、放射線200Gy照射後、TNF-α(50ng/ml ; R＆D System)を添加し未熟樹状細胞と混合培養する事で抗原提示能を獲得した、成熟樹状細胞を精製した。精製した樹状細胞をフローサイトメトリー(FACS calibur ; Becton Dickinson)で解析し、未熟樹状細砲ではCD14の陰性化、CD80,86の陽性化を確認。また成熟樹状細胞では、CD83の陽性化およびCTL(Cytotoxic T Lymphocyte)活性を測定するため、Intracellular stainingをおこなった所、IFN-γの産生も確認できた。樹上細胞の精製法は確立でき、杏林大学医学部倫理委員会の承認も得られたため、今後投与経路、投与法、投与間隔、のスケジュールを立て、臨床で使用して行く予定である。

About 50-400ml of blood is collected from the patient's blood collection tube, and the peripheral blood is separated by the specific gravity remote method. Magnetic Cell Isolation Kit (Blood Dendritic Cell Isolation Kit ; Miltenyi Biotech GmbH) uses negative selection to isolate dendritic cells. 10% of patients serum added RPM1 day culture 2 hours CO2 before culture, plate non-attached cells removed from attached cells dendritic cells before cells IL-4(1000U/ML ; Cell Genix),GM-CSF(1000 U/ml ; Leukomax ; Novartis) added 5 days culture, immature dendritic cells purified. Cancer cells from patients were aseptically extracted at the time of surgery, and after irradiation with 200Gy of radiation, TNF-α(50ng/ml ; R&D System) was added to immature dendritic cells and mixed culture. Antigen tips were obtained and mature dendritic cells were purified. Analysis of purified dendritic cells (FACS calibur ; Becton Dickinson) and identification of CD14 negativity and CD80,86 positivity in immature dendritic cells CD83 positivity and CTL(Cytotoxic T Lymphocyte) activity in mature dendritic cells were determined. Intracellular staining and IFN-γ production were confirmed. The purification method of tree cells has been established, and the Ethics Committee of Xinglin University Medical School has approved the establishment of the future injection route, injection method, injection interval, and clinical use.