赤痢アメーバの表面レクチンを標的とした防御免疫の構築

赤痢アメーバの150-kDa表面レクチン(Igl)に着目し、アメーバ症の予防法確立をめざして研究を行った。これまでの研究において、虫体より精製したnativeなIglではハムスターの肝膿瘍形成を阻止するワクチン効果が認められたのに対し、大腸菌で作製した組換え型Iglでは効果がなかった。そこで糖鎖が重要であると考え、今年度は酵母によるIglの作製について検討した。まず、全長IglのPichia pastorisによる発現を試みたが、蛋白質産生を確認できなかった。次にC末端断片の発現を試みたところ、目的のサイズの組換え蛋白質を作製できた。しかし、抗Igl抗体や患者血清との反応を検討したところ、抗原性が認められなかった。その理由は現在のところ不明であり、今後さらに検討が必要である。また、赤痢アメーバと形態的に類似するものの病原性のないEntamoeba disparについて、Igl遺伝子のクローニングを行った。その結果、赤痢アメーバ同様に2つのIgl遺伝子が存在することが明らかになった。そこで、E.disparと赤痢アメーバのそれぞれ2つのIgl遺伝子について、発現量をreal-time RT-PCRで比較解析した。E.disparでも、赤痢アメーバより少ないものの発現が認められ、Iglは病原性のないアメーバにおいても必須の蛋白質であると推定された。また、Iglの発現量は、E.dispar赤痢アメーバのいずれにおいても、Igl2の約7倍であった。E.disparと赤痢アメーバのそれぞれ2つのIglについて、N末端とC末端のシグナル配列を除く全長を大腸菌で産生させ、赤痢アメーバ症患者血清や抗赤痢アメーバIgl抗体との反応性を比較した。患者血清やポリクローナル抗体はE.disparのIglに対しても反応し、アミノ酸配列の比較から、特にC末端側に共通のエピトープが多く存在すると考えられた。

赤痢アメーバの150-kDa表面レクチン(Igl)に着目し、アメーバ症の予防法確立をめざして研究を行った。これまでの研究において、虫体より精製したnativeなIglではハムスターの肝膿瘍形成を阻止するワクチン効果が認められたのに対し、大腸菌で作製した組換え型Iglでは効果がなかった。そこで糖鎖が重要であると考え、今年度は酵母によるIglの作製について検討した。まず、全長IglのPichia pastorisによる発現を試みたが、蛋白質産生を確認できなかった。次にC末端断片の発現を試みたところ、目的のサイズの組換え蛋白質を作製できた。しかし、抗Igl抗体や患者血清との反応を検討したところ、抗原性が認められなかった。その理由は現在のところ不明であり、今後さらに検討が必要である。また、赤痢アメーバと形態的に類似するものの病原性のないEntamoeba disparについて、Igl遺伝子のクローニングを行った。その結果、赤痢アメーバ同様に2つのIgl遺伝子が存在することが明らかになった。そこで、E.disparと赤痢アメーバのそれぞれ2つのIgl遺伝子について、発現量をreal-time RT-PCRで比較解析した。E.disparでも、赤痢アメーバより少ないものの発現が認められ、Iglは病原性のないアメーバにおいても必須の蛋白質であると推定された。また、Iglの発現量は、E.dispar赤痢アメーバのいずれにおいても、Igl2の約7倍であった。E.disparと赤痢アメーバのそれぞれ2つのIglについて、N末端とC末端のシグナル配列を除く全長を大腸菌で産生させ、赤痢アメーバ症患者血清や抗赤痢アメーバIgl抗体との反応性を比較した。患者血清やポリクローナル抗体はE.disparのIglに対しても反応し、アミノ酸配列の比較から、特にC末端側に共通のエピトープが多く存在すると考えられた。