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赤痢アメーバの表面レクチンを標的とした防御免疫の構築

针对溶组织内阿米巴表面凝集素的保护性免疫的构建

基本信息

批准号：
03F00164
负责人：
橘裕司
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03F00164/
关键词：
赤痢アメーバ接着レクチンモノクローナル抗体組換え蛋白質

项目摘要

赤痢アメーバの150-kDaレクチン(Igl1)について、全長[シグナル配列を除くamino acid(aa)14-1088]、N末端側(aa 14-382、N断片)、中央部(aa 294-753、M断片)、C末端側(aa 603-1088、C断片)に相当する組換え蛋白質を大腸菌で発現させ、精製とrefoldingの条件検討を行った。全長の組換え蛋白質の場合には、大腸菌由来の他の蛋白質の混入が見られたため、患者血清を用いたウェスタンイムノブロットによる抗原性の解析を行った。その結果、アメーバ性肝膿瘍患者やアメーバ性大腸炎患者の血清は、組換えIglに相当するバンドと明瞭に反応した。また、無症候性赤痢アメーバ嚢子排出者の血清も、組換え型全長Iglを認識していた。Iglのアミノ酸配列には多数のCXXCモチーフが存在するが、それは同じく腸管寄生原虫であるGiardia intestinalisのvariant-specific surface antigenにも存在するため、共通のエピトープが存在する可能性も考えられた。そこで、ジアルジア症患者血清を用いてウェスタンイムノブロットを行ったが、Iglには反応せず、この蛋白質が赤痢アメーバに特異的な抗原性を有していると考えられた。また、組換えIglのワクチン効果について検討するため、全長組換え蛋白質をアジュバントとともにハムスターの腹腔に接種した後、肝臓に直接栄養型虫体を接種し、一週間後に肝膿瘍の大きさを調べた。しかしながら、有意な膿瘍形成阻止効果は認められなかった。NativeなIglによる免疫は有効であったことから、今後、酵母などを用いた系での組換えIglの調製も検討していく必要があると考えられた。

The conditions for the development, purification and refolding of proteins in Escherichia coli were discussed. In the case of full-length proteins, the incorporation of other proteins from Escherichia coli and the analysis of antigenicity in patient sera The results showed that serum levels of Igl in patients with pustular liver disease and colitis were significantly higher than those in patients with chronic colitis. The serum of patients with asymptomatic diarrhea and the full-length Igl of patients with asymptomatic diarrhea are recognized. A study of the possibility of the existence of most of the CXXC antigens in the intestinal parasite, Giardia intestinalis, The serum of patients with acute respiratory syndrome is used to detect the specific antigenicity of the protein. In addition, the protein content of Igl and Igl was increased after intraperitoneal inoculation, and the liver pustules were increased after inoculation. To prevent pustules from forming, to prevent pustules from forming. Native Igl is a natural immune system. It is necessary to study the immune system.