赤痢アメーバの表面レクチンを標的とした防御免疫の構築

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赤痢アメーバの150-kDaレクチン(Igl1)について、全長[シグナル配列を除くamino acid(aa)14-1088]、N末端側(aa 14-382、N断片)、中央部(aa 294-753、M断片)、C末端側(aa 603-1088、C断片)に相当する組換え蛋白質を大腸菌で発現させ、精製とrefoldingの条件検討を行った。全長の組換え蛋白質の場合には、大腸菌由来の他の蛋白質の混入が見られたため、患者血清を用いたウェスタンイムノブロットによる抗原性の解析を行った。その結果、アメーバ性肝膿瘍患者やアメーバ性大腸炎患者の血清は、組換えIglに相当するバンドと明瞭に反応した。また、無症候性赤痢アメーバ嚢子排出者の血清も、組換え型全長Iglを認識していた。Iglのアミノ酸配列には多数のCXXCモチーフが存在するが、それは同じく腸管寄生原虫であるGiardia intestinalisのvariant-specific surface antigenにも存在するため、共通のエピトープが存在する可能性も考えられた。そこで、ジアルジア症患者血清を用いてウェスタンイムノブロットを行ったが、Iglには反応せず、この蛋白質が赤痢アメーバに特異的な抗原性を有していると考えられた。また、組換えIglのワクチン効果について検討するため、全長組換え蛋白質をアジュバントとともにハムスターの腹腔に接種した後、肝臓に直接栄養型虫体を接種し、一週間後に肝膿瘍の大きさを調べた。しかしながら、有意な膿瘍形成阻止効果は認められなかった。NativeなIglによる免疫は有効であったことから、今後、酵母などを用いた系での組換えIglの調製も検討していく必要があると考えられた。