新規がん抑制遺伝子産物MY018Bのがん悪性化における機能解析

新型抑癌基因产物MY018B在恶性肿瘤中的功能分析

• 批准号: 03J01450
• 负责人: 安島 理恵子
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J01450/
• 关键词: MYO18B; ミオシン; 心筋; アクチン鎖; 中心体; がん抑制遺伝子; アクチン; 筋肉; 心臓

新規ミオシンファミリータンパク質をコードするMYO18B遺伝子は、ヒト肺がん細胞で高頻度に失活しており、新規がん抑制遺伝子である可能性が示唆されている。MYO18Bの個体における機能を解析する為、ジーンターゲティング法を用い、MYO18B遺伝子のプロモーターの下流にβ-gal遺伝子を挿入し、遺伝子欠損マウスを作成した。ヘテロマウスを用いたLacZ染色により、MYO18Bは骨格筋、心筋に強い発現することがわかった。MYO18B遺伝子のプロモーターの解析により、筋細胞におけるMYO18B遺伝子の発現に、転写因子MEF2が寄与することが示唆された。ヘテロマウス同士の掛け合わせにより得られる胎児の解析により、MYO18Bノックアウトマウスは、心筋細胞のサルコメア構造の異常により、受精後10-12日目に致死になることがわかった。以上の結果よりMYO18Bは心筋の発生・機能において重要な役割を担っていることが示された。MYO18B遺伝子産物の細胞内における機能を解析する為、MYO18Bの細胞内局在の解析を行った。細胞に導入したMYO18Bはアクチン鎖上および中心体に局在が確認された。更にMYO18Bのアクチン鎖及び中心体への局在に必要な部位を同定する為、MYO18Bの欠失変異体の細胞内局在を解析した。その結果、MYO18BのN末端側半分がアクチン鎖上の局在に、C末端側半分の領域がMYO18Bの中心体への局在に必要なことがわかった。NIH3T3細胞にMYO18BおよびMYO18Bの欠失変異体を導入したところ、MYO18B C末端側領域の過剰発現により中心体の数の増加が認められた。以上の結果より、MYO18Bは中心体の数を保つ機能を有し、MYO18B C末端側領域がドミナントネガティブに働くことによりその機能が阻害され、中心体の数の増加を引き起こす可能性が示唆された。

编码一种新型肌球蛋白家族蛋白的MyO18b基因在人肺癌细胞中高度灭活，这表明它可能是一种新型的癌症抑制基因。为了分析MyO18b在个体中的功能，使用基因靶向插入Myo18b基因启动子下游的β-GAL基因，以创建缺乏基因的小鼠。使用异性小鼠进行LACZ染色表明，肌肉和心肌在骨骼和心肌中强烈表达。对Myo18b基因启动子的分析表明，转录因子MEF2有助于肌细胞中肌细胞中肌细胞的表达。异源杂交获得的胎儿分析表明，由于心肌细胞的异常肌膜结构，受精后10-12天，Myo18b敲除小鼠致死。以上结果表明，Myo18b在心肌的发展和功能中起着重要作用。为了分析Myo18b基因产物的细胞内功能，我们分析了Myo18b的细胞内定位。确认了肌动蛋白链和中心体上细胞中引入细胞的MyO18b的定位。此外，为了确定肌动蛋白链和中心体的定位所需的位点，分析了myo18b缺失突变体的亚细胞定位。结果，发现需要在肌动蛋白链上定位的Myo18b的N末端一半，并且需要区域的C末端一半才能定位至myo18b的中心体。当将MyO18b和MyO18b缺失突变体引入NIH3T3细胞时，Myo18b的C末端区域的过表达增加了中心体的数量。上述结果表明，MyO18b具有维持中心体数量的功能，并且MyO18B C末端区域的功能受到主导性负作用的功能的抑制，从而导致中心体数量增加。