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超好熱始原菌における遺伝子交換系の構築に関する研究〜およびその系を利用した研究〜

超嗜热古菌基因交换系统的构建及利用该系统的研究

基本信息

批准号：
03J05649
负责人：
佐藤喬章
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

[背景]一般的に細菌や真核生物は核酸の前駆体となるリブロース-5-リン酸(Ru5P)をペントースリン酸経路(PPP)により生合成している。しかし、始原菌のほとんどはPPPを構成する遺伝子セットを持っておらず、どのようにRu5P・核酸を合成しているのか不明であった。そこで、ヘキスロースリン酸シンターゼ(HPS)およびホスホヘキスロイソメラーゼ(PHI)から構成されるリブロースモノリン酸(RuMP)経路が注目された。この経路は当初、ホルムアルデヒドを無毒化・固定するための経路として考えられていたが、それらの遺伝子(hpsおよびphi)がPPPを持たない始原菌にも分布していること、その逆反応がRu5P合成反応に当たること等から、このRuMP経路が始原菌においてRu5Pを合成している可能性が考えられた。[進行状況]そこで平成17年度はこれまでに構築した遺伝子破壊系を用いて、超好熱始原菌Thermococcus kodakaraensisにおいてRuMP経路が核酸合成に寄与しているかを調べた。本菌はhpsとphiを1つの融合遺伝子(hps/phi)として保有している。trpE遺伝子を選択マーカー、trpE破壊株KW128を宿主としてhps/phi破壊株(Δhps/phi)を作製した。PCR、サザンブロット、シーケンス解析により目的の遺伝子型であることを確認した。宿主KW128はヌクレオシドの有無にかかわらずアミノ酸培地で増殖を示したのに対し、Δhps/phi株はヌクレオシド添加時のみ増殖を示した。さらに本菌が炭素源として利用できるピルビン酸やマルトデキストリンをヌクレオシドの代わりに加えてもΔhps/phi株は増殖を示さなかったことから、炭素源が不足して増殖していない訳ではないことを確認できた。このように、本菌ではRuMP経路が核酸合成のための経路として機能していることを明らかにした。

[Background] The general bacteria and eukaryotes are involved in the synthesis of nucleic acid precursors and 5-amino acid (Ru5P) molecules via the amino acid pathway (PPP). The DNA sequence of the protoplast is unknown. In addition to the above, it is also possible to create a system of high-quality products such as high-quality products (HPS), high-quality products (PHI) and high-quality products such as high-quality products (RuMP). In this paper, the author discusses the possibility of RuMP synthesis in China. [Status] In 2017, the construction of a recombinant plasmid system was carried out by Thermococcus kodakaraensis, a super-good pathogen, and the regulation of the RuMP pathway for nucleic acid synthesis. This bacterium has a fusion gene (hps/phi) of hps/phi. trpE strain KW128 is a host strain and hps/phi strain is a control strain. PCR, The host KW128 has no control over the growth of the acid culture, and the growth of the delta hps/phi plant has no control over the growth of the acid culture. The carbon source of this bacterium is not available. The carbon source is insufficient. The bacteria are responsible for the synthesis of nucleic acids and their functions.