基本転写因子TFIIEとTFIIHによる核内シグナル伝達と転写のカップリング機構

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1.TFIIEの構造解析TFIIEのTFIIEβサブユニットは、1本鎖と2本鎖のDNAと結合しプロモーターメルティングに重要な役割を果たしている。今回、ヒトTFIIEβコアドメインを決定し、構造を解析したところ、2本鎖DNA結合領域を有していた。その構造はwinged helixと呼ばれる3つのα-ヘリックスと3つのβ-ストランドによる構造を取っていた。これは今まで基本転写因子TFIIFβ(RAP30)や転写制御因子HNF3γにも見出された構造であったが、これらの2本鎖DNA結合表面の裏側に相当する部分でDNA結合する新しい結合様式を有していた。2.TFIIHのキナーゼの基質特異性及びPol IIのCTDリン酸化の転写との関連性の解析TFIIHは、サブユニットのうちCdk7にキナーゼ活性を有する。Cdk7はCyclinH(CycH)、MAT1とCAK複合体を形成し、CAK単独ではTFIIHとは異なる細胞周期制御の機能を果たしている。そこでCAKとTFIIHとの基質特異性を調べた。すると共にCdk2、Cdk4という細胞周期の制御キナーゼをリン酸化するがCAKはCdk2、TFIIHはCdk4をより強くリン酸化した。またTFIIHのみが転写開始複合体内でPol IIをリン酸化し得ること、特にCTD領域の5位のSerリン酸化がTFIIEで誘起され転写活性と関連深いことが分った。3.TFIIHとDNA修復関連蛋白質の相互認識機構の研究精製した蛋白質による試験管内無細胞DNA除去修復系を構築し、クロモソーム構造を有したSV40DNA上のDNA除去修復の際にTFIIHがいかに情報認識を行なっているかを生化学的に解析している。具体的には、現在までに修復因子XPC、XPGとTFIIHとの相互作用が見い出された。更に機能的な関連性について、検討しているところである。