ヒト胚盤胞細胞に対する分子生物学的手法を用いた着床前診断に関する研究

人囊胚细胞植入前分子生物学诊断研究

• 批准号: 15790902
• 负责人: 佐藤 剛
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790902/
• 关键词: ヒト初期胚; 胚盤胞; 胚生検; FISH; 着床前診断

当施設での体外受精・胚移植治療により得られた受精卵のうち、胚の質が悪く移植に適さないものや、治療周期に妊娠が成立したため廃棄の予定となる凍結余剰胚を患者夫婦の同意を得て検討対象とした。これらの胚を受精後4〜5日にあたる時期まで体外培養し、桑実胚〜胚盤胞に達した時点でマイクロマニピュレータを使用して透明帯に小孔を形成した。そのまま12〜24時間培養を継続し、胚の一部が透明帯の小孔を通して突出してきたところで、マイクロマニピュレータを使用して突出した部分の細胞塊を切除生検した。生検は桑実胚〜胚盤胞に達したほとんどの胚で可能であり、解析対象としての細胞を得る生検方法として本法は有用であると考えられた。生検した細胞塊をピペッティングにて分離し、1〜数細胞ずつスライドグラス上に、吉澤ら(1997)の方法を用いて固定した。4〜8細胞期の割球を用いた場合に比較して、桑実胚〜胚盤胞の細胞を用いた場合、それぞれの細胞の大きさが小さい分、操作中の細胞の損傷、紛失がやや増加したが、細胞を移動・操作する場合に用いるピペットの太さ等を工夫することにより、これらの損傷、紛失の率は低下が可能であった。スライドグラス上に固定した核に対して、13番、18番、21番および性染色体に対するプローブを用いてFISHを施行した。FISH後のシグナルの検出率は、これまで4〜8細胞期の割球を用いて行った成績と同様高いものであった。桑実胚〜胚盤胞の細胞を用いた染色体の解析では、初期胚からの細胞を用いた場合よりmosaicismの率がやや上昇した。これは、解析可能な検体数の増加により、mosaicismがより正確に診断できたためと考えられる。桑実胚〜胚盤胞期の細胞を用いても胚の遺伝的解析は十分可能と考えられる結果であり、臨床的にも応用可能であると思われた。

When in vitro fertilization and embryo transfer therapy is performed, the fertilized egg is obtained, the embryo is transferred appropriately, the pregnancy is established during the treatment cycle, the embryo is frozen, and the consent of the patient's husband and wife is obtained. 4 ~ 5 days after fertilization, the embryo is cultured in vitro, and the blastocyst is cultured in vitro. 12 ~ 24 hours of culture, a part of the embryo transparent area of the small hole to pass through, the use of the protruding part of the cell block to cut off This method is useful for the analysis of embryonic cells. Cell masses are separated and fixed using the method described in Yoshizawa (1997). 4 ~ 8 cell stage of the cutting ball in the case of use, mulberry embryo to blastoderm cells in the case of use, all the cells in the large and small size, operation of the cell damage, loss, increase, cell movement, operation, etc. in the case of use, such as the time, damage, loss rate may be low. FISH was performed on the chromosome of the chromosome 13, 18, 21, and 18. After FISH, the detection rate of fish in 4 ~ 8 cell stage was higher than that in other stages. The rate of mosaicism increased significantly in the early embryo stage. The increase in the number of possible diagnostic tests and mosaicism may result in the diagnosis of the disease. It is very possible to analyze the embryonic DNA of the cells in the embryonic stage of mulberry, and it is possible to use it in clinical practice.