増殖因子受容体の分解機構の解析

生长因子受体降解机制分析

• 批准号: 04J04686
• 负责人: 水野 英美
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J04686/
• 关键词: エンドソーム; 脱ユビキチン化酵素; 脱ユビキチン化; ユビキチン化; メンブレントラフィック; ユビキチン; 選別輸送; 増殖因子受容体; ダウンレギュレーション

増殖因子により活性化された増殖因子受容体はエンドサイトーシスによって細胞内に取り込まれ、エンドソームを経由してリソソームへと運ばれ分解される。これらの受容体はユビキチン化を受け、エンドソームにおいて一連のユビキチン結合蛋白質複合体により認識される。エンドソーム上で機能するマシーナリー蛋白質のうちいくつかはモノユビキチン化を受けており、ユビキチン化によりそれらの蛋白質の機能調節およびエンドソームにおける選別輸送の調節が行われていることが示唆されている。今年度はUBPYがこれらのエンドソーム蛋白質の機能調節を行っている可能性について検討した。UBPYの酵素活性部位変異体発現細胞、およびRNAi法により内在性のUBPYをノックダウンした細胞ではユビキチン化蛋白質が主に初期エンドソーム上に蓄積した。さらに、UBPYの機能阻害細胞では初期エンドソームの形態変化が引き起こされた。電子顕微鏡観察により、エンドソームの形態変化はエンドソームの凝集であること、凝集したエンドソーム間には高電子密度の領域が存在することが明らかになった。次に、モノユビキチン化を受けることが報告されているエンドソーム蛋白質(Hrs, STAM, Eps15, Tsg101)のユビキチン化レベルをUBPYが調節している可能性を調べた。その結果、UBPY機能阻害細胞ではEps15のユビキチン化レベルが大きく上昇していることを見いだした。UBPYは細胞内でEps15と結合し、UBPYの酵素活性部位変異体ではその結合が増強されること、UBPYがin vitroでEps15の脱ユビキチン化を行ったことから、Eps15はUBPYの基質となり得ることが示された。またEps15はUBPY機能阻害細胞において凝集したエンドソーム上に蓄積し、ユビキチン化蛋白質と共局在した。以上の結果から、UBPYはエンドソーム上の蛋白質のユビキチン化レベルを調節し、その調節がエンドソームの形態維持に必要であることが示唆された。

Rights colonization factor に よ り activeness さ れ た raised colonization factor by the capacity of body は エ ン ド サ イ ト ー シ ス に よ っ て in cells take り に 込 ま れ, エ ン ド ソ ー ム を 経 by し て リ ソ ソ ー ム へ と luck ば れ decomposition さ れ る. こ れ ら の is let body は ユ ビ キ チ ン を by け, エ ン ド ソ ー ム に お い て for の ユ ビ キ チ ン binding protein complex に よ り know さ れ る. エ ン ド ソ ー ム で function on す る マ シ ー ナ リ ー protein の う ち い く つ か は モ ノ ユ ビ キ チ ン change を by け て お り, ユ ビ キ チ ン change に よ り そ れ ら の protein の functional regulation お よ び エ ン ド ソ ー ム に お け る choose don't conveying line の adjust が わ れ て い る こ と が in stopping さ れ て い る. Our は UBPY が こ れ ら の エ ン ド ソ ー ム protein の functional regulation line を っ て い る possibility に つ い て beg し 検 た. UBPY の enzyme active site - variant 発 cells, お よ び RNAi method に よ り internality の UBPY を ノ ッ ク ダ ウ ン し た cells で は ユ ビ キ チ ン mineralization protein が main に early エ ン ド ソ ー ム に accumulation on し た. Youdaoplaceholder0, UBPY <s:1> function hinders the で <s:1> initial エ ドソ ドソ ム ム <s:1> morphological change が of <s:1> cells, which leads to が and された された. Electronic 顕 micromirror 観 examine に よ り, エ ン ド ソ ー ム の morphology variations は エ ン ド ソ ー ム の agglutination で あ る こ と, agglutination し た エ ン ド ソ ー ム between に は が の high electron density field exist す る こ と が Ming ら か に な っ た. に, モ ノ ユ ビ キ チ ン change を by け る こ と が report さ れ て い る エ ン ド ソ ー ム protein (Hrs, STAM, Eps15 Tsg101) の ユ ビ キ チ ン change レ ベ ル を UBPY が adjust し て い る possibility を adjustable べ た. そ の result, function of UBPY resistance against cell で は Eps15 の ユ ビ キ チ ン change レ ベ ル が big き く rise し て い る こ と を see い だ し た. UBPY は intracellular で Eps15 と し, UBPY の enzyme active site - variant で は そ の combining が raised strong さ れ る こ と, UBPY が in vitro で Eps15 の ユ off ビ キ チ ン change line を っ た こ と か ら, Eps15 は UBPY の matrix と な り must る こ と が shown さ れ た. ま た Eps15 は UBPY function resistance against cell に お い て agglutination し た エ ン ド ソ ー ム に accumulation し, ユ ビ キ チ ン mineralization protein と total bureau in し た. の above results か ら, UBPY は エ ン ド ソ ー ム の on protein の ユ ビ キ チ ン change レ ベ ル を し adjustment and そ の adjust が エ ン ド ソ ー ム の form to maintain necessary で に あ る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

エンドソームにおけるメンブレントラフィックの脱ユビキチン化酵素による調節

通过去泛素化酶调节内涵体中的膜运输

• 发表时间: 2006
• 期刊: 細胞工学 25(11)
• 作者: 駒田雅之;水野英美
• 通讯作者: 水野英美

Association with Hrs is required for the early endosomal localization, stability, and function of STAM

• DOI: 10.1093/jb/mvh046
• 发表时间: 2004-03-01
• 期刊: JOURNAL OF BIOCHEMISTRY
• 影响因子: 2.7
• 作者: Mizuno, E;Kawahata, K;Komada, M
• 通讯作者: Komada, M

A deubiquitinating enzyme UBPY regulates the level of protein ubiquitination on endosomes

• DOI: 10.1111/j.1600-0854.2006.00452.x
• 发表时间: 2006-08-01
• 期刊: TRAFFIC
• 影响因子: 4.5
• 作者: Mizuno, Emi;Kobayashi, Kaoru;Komada, Masayuki
• 通讯作者: Komada, Masayuki

Regulation of epidermal growth factor receptor down-regulation by UBPY-mediated deubiquitination at endosomes

• DOI: 10.1091/mbc.e05-06-0560
• 发表时间: 2005-11-01
• 期刊: MOLECULAR BIOLOGY OF THE CELL
• 影响因子: 3.3
• 作者: Mizuno, E;Iura, T;Komada, M
• 通讯作者: Komada, M

A role for Hrs in endosomal sorting of ligand-stimulated and unstimulated epidermal growth factor receptor

• DOI: 10.1016/j.yexcr.2004.03.038
• 发表时间: 2004-07-15
• 期刊: EXPERIMENTAL CELL RESEARCH
• 影响因子: 3.7
• 作者: Morino, C;Kato, M;Kitamura, N
• 通讯作者: Kitamura, N