プリオンタンパク質のコンホメーション変化誘導の構造要因と誘導要因センシング

感测诱导朊病毒蛋白构象变化的结构和诱导因子

• 批准号: 04J06370
• 负责人: 松島 綾美
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J06370/
• 关键词: プリオンタンパク質; 抗体; 構造解析; 牛海綿脳症(BSE)

(1)正常型プリオン構造に重要な分子内相互作用部位の同定マウスのプリオンタンパク質の発現を行った。N端ドメイン(アミノ酸残基23-120位に相当)をグルタチオンS-トランスフェラーゼ(GST)融合タンパク質として大腸菌で発現し、アフィニティーカラムで精製の後、GST部分を酵素で切断してN端ドメインのタンパク質を得た。このタンパク質の質量分析解析を行ったところ、二量体、三量体に相当する質量を持つ分子ピークが観測された。この結果は、通常「特別な構造を持たない」とされるN端ドメインが、プリオンの多量体化に関与することを示唆する初めての結果である。そこで、N端ドメインのオクタリピートと呼ばれる、8アミノ酸残基が4回繰り返される領域に注目した。このリピート単位を1、2、3、そして4回繰り返すペプチドを化学合成し、発現タンパク質と同様に質量分析を行ったところ、リピート数が2以上のペプチドでは多量体が観測されたが、1回のみのペプチドでは観測されなかった。これより、繰り返し配列の存在が多量体形成に重要であることを示した。(2)プリオン構造の特異的認識抗体の調製Ac-GGGOXGGGOXGGG-NH2(O=酸化アミノ酸残基、X=プリオン配列中の隣接残基、G=Gly)のアミノ酸配列を持つペプチドをそれぞれ化学合成した。これを用いてマウスモノクローナル抗体作製を行い、抗原ペプチドを特異的に認識する抗体を選別した。また、N端ドメインの部分配列に由来する抗体も作製し、この抗体は、pH、陽イオンの有無などにより、部分ペプチドを特異的に識別することが判明した。

(1) normal type プ リ オ ン tectonic に important な intramolecular interaction part の be マ ウ ス の プ リ オ ン タ ン パ ク qualitative の 発 line now を っ た. N-terminal ド メ イ ン (ア ミ ノ acid residues 23-120 に) を グ ル タ チ オ ン S - ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ (GST) fusion タ ン パ ク qualitative と し て coliform で 発 し, ア フ ィ ニ テ ィ ー カ ラ ム で refined after の, GST part で を enzyme cut し て n-terminal ド メ イ ン の タ ン パ ク qualitative を た. こ の タ ン パ ク の quality analysis of analytical line を っ た と こ ろ, quantity, amount of three に quite す る quality を hold つ molecular ピ ー ク が 観 measuring さ れ た. こ の results は, usually を "special な structure with た な い" と さ れ る n-terminal ド メ イ ン が, プ リ オ ン の quantity body is changed more に masato and す る こ と を in stopping す る early め て の results で あ る. そ こ で, n-terminal ド メ イ ン の オ ク タ リ ピ ー ト と shout ば れ る, 8 ア ミ ノ acid residues が 4 back Qiao り return さ れ る field に attention し た. こ の リ ピ ー ト 単 を 1, 2, 3, そ し て 4 back Qiao り return す ペ プ チ ド を chemical synthetic し, 発 now タ ン パ ク qualitative と with others in line に quality analysis を っ た と こ ろ, リ ピ ー ト が 2 above の ペ プ チ ド で は much quantity body が 観 measuring さ れ た が, 1 の み の ペ プ チ ド で は 観 measuring さ れ な か っ た. The <s:1> れよ れよ, the return of the coomotte to the coomotte arrangement, the existence of が mass formation に important である <s:1> とを とを show <s:1> た た. (2) プ リ オ の ン structure the understanding of the specific antibody の modulated Ac - GGGOXGGGOXGGG - NH2 (O = acidification ア ミ ノ acid residue, X = プ リ オ ン match column の 隣 residues, G = Gly) の ア ミ ノ acid with column を hold つ ペ プ チ ド を そ れ ぞ れ chemical synthesis し た. こ れ を with い て マ ウ ス モ ノ ク ロ ー ナ ル antibodies for line を い, antigen ペ プ チ ド を specific に know す る antibody を choose don't し た. ま た, n-terminal ド メ イ ン の department assign column に origin す る し, the antibody も cropping こ は の antibody, pH, Yang イ オ ン の presence of な ど に よ り, partial ペ プ チ ド を specific に recognition す る こ と が.at し た.

项目成果

Conformation Change-senseing Assay Using, Monoclonal Antibody for N-terminal Octapeptide Repreat Region of Prion Protein

使用单克隆抗体进行朊病毒蛋白 N 末端八肽重复区的构象变化传感测定

• 发表时间: 2005
• 期刊: Peptide Science 2004
• 作者: M.Kawano;et al.
• 通讯作者: et al.

Molecular Cloning and Circadian Expression Profile of Pacemaker Neuropeptide PDF in Diptera

双翅目起搏神经肽 PDF 的分子克隆和昼夜节律表达谱

• 期刊: Lett.Peptide Sci. (in press)
• 作者: Hayashi;T et al.;M.Kawano et al.;M.Kawano et al.;A.Matsushima et al.
• 通讯作者: A.Matsushima et al.

Structural Requirements of the N-terminal Octapeptide Repeat of Prion Protein

朊病毒蛋白N端八肽重复序列的结构要求

• 发表时间: 2004
• 期刊: Peptide Science 2003
• 作者: Hayashi;T et al.;M.Kawano et al.
• 通讯作者: M.Kawano et al.