ウシ体細胞核移植系を用いた体細胞核初期化機構の基礎研究

利用牛体细胞核移植系统进行体细胞核重编程机制的基础研究

• 批准号: 16780197
• 负责人: 谷 哲弥
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16780197/
• 关键词: ウシ未受精卵子; 体細胞核移植; 核の初期化; 未受精卵子; 核移植; 初期化

核移植技術を用いた体細胞クローン動物の作出は、未受精卵子の中に含まれると考えられる体細胞核を初期化することができる因子の存在を明らかにした。また、細胞周期制御の観点から核移植卵の正常性を検討した結果、MII期卵が紡錘体阻害剤により活性化されるスピンドルチェックポイントを核移植卵で調べると、未受精卵子の場合と異なり活性化しないことが明らかとなった。体細胞核の初期化を誘導する可能性のある因子をウシ未受精卵子のプロテオームにより同定した。そのタンパクは、リン酸化されたTCTP(transcriptionally controlled tumor protein)であり、体細胞核移植卵の胚盤胞期への発生率と相関があることから、体細胞核の初期化機構との相関を詳細に調べた。ウシ未成熟卵子に合成RNAおよびdsRNAインジェクションして強制発現させた卵は、MI期で細胞周期を停止させたが、dsRNAにより発現を阻害した卵子は通常にMII期まで達した。dsRNAによりTCTPの発現を阻害した卵を用いて体外受精・体細胞核移植により発生能を調べると体細胞核移植卵のみ発生能は低下した。さらに、予めドナー細胞である体細胞にリン酸化部位を含むTCTPのペプチドをHIV envelop法を用いて取り込ませた後、核移植卵を作成し体外及び体内発生率を検討した。その結果、体外発生能において差が見られなかったが体内発生能において発生率が向上した。すなわち17頭の受胚雌に移植した結果、8頭(47%)が受胎したが、うち1頭(13%)が妊娠51日目に流産した。その他の妊娠雌は、いずれも自然分娩で正常な子ウシを分娩した。ペプチドを導入しない同じ体細胞を用いた場合の核移植卵の体内発生能は、受胎率は31%(4/13)、流産率は50%(2/4)、分娩後1ヶ月目の子ウシの生存率は0%(0/2)であった。このことからリン酸化TCTPペプチドを導入した体細胞を用いることによって正常な体細胞クローンウシの作出率が向上した。

Nuclear transfer technology is used in somatic cells and animals, including unfertilized eggs. In addition, the cell cycle control point is different from that of the nuclear transfer egg. The results show that the MII stage egg is activated by the spindle inhibitor, and the unfertilized egg is activated in different situations. The possibility of induction of somatic nuclei is determined by factors such as the number of embryos in the embryo. TCTP(transcriptionally controlled tumor protein) is the most important protein in somatic cell nuclear transfer. It synthesizes RNA and dsRNA in immature eggs, and stress occurs in eggs that are normally at MII. In vitro fertilization and somatic cell nuclear transfer, the development of TCTP is inhibited and the development of somatic cell nuclear transfer is reduced To investigate the in vitro and in vivo survival rates of nuclear transfer eggs produced by TCTP and HIV envelop methods. The results show that the in vitro production rate is higher than that of the in vivo production rate. Among the 17 embryos transferred, 8 (47%) were pregnant and 1 (13%) aborted on the 51st day of pregnancy. All pregnant women give birth naturally and naturally. In vivo viability, conception rate, abortion rate, and survival rate of embryos were 31%(4/13), 50%(2/4), and 0%(0/2), respectively. The rate of production of TCTP in normal somatic cells is higher than that in normal somatic cells