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蛋白質の異性化が細胞内情報伝達に及ぼす影響の解析

蛋白质异构化对细胞内信号传递的影响分析

基本信息

批准号：
16790061
负责人：
古地壯光
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790061/
关键词：
アスパラギン酸アスパラギン PIMT 異性化ラセミ化

项目摘要

蛋白質において、アスパラギンやアスパラギン酸残基は、異性化やラセミ化を非常に起こしやすく、その劣化に伴いL-イソアスパラギン酸(IsoAsp)およびD-アスパラギン酸(D-Asp)が生じることが知られている。本研究では、蛋白質中のアスパラギンやアスパラギン酸残基の異性化ないしラセミ化が細胞内の蛋白質機能に及ぼす影響に関して、その修復酵素であるprotein L-isoaspartate/D-aspartate O-methyltransferase(PIMT)の発現抑制細胞を作製し、それを用いることにより解析を行った。その結果、PIMT発現抑制株においてEGF刺激によるMEKおよびその下流であるERKのリン酸化の亢進および持続が認められた。そこで次に、MEKの上流であるRafのリン酸化について解析を行ったところ、同様にPIMT発現抑制株においてリン酸化の亢進が認められた。現在は、EGFシグナル伝達系に異常亢進が生じるメカニズムの解明に向け、更なる解析を行っている。また、細胞内のPIMT活性を測定する系の開発も試みた。酵素反応条件およびHPLCの溶出条件を種々検討した結果、蛍光ラベルしたisoAsp含有ペプチドおよびそのメチル化体を分離検出する簡便なアッセイ系の確立に成功した。さらに、細胞抽出液を用いた実験においても、簡単な前処理を行うことにより、PIMT活性が測定できることを確認した。本系は全工程を含めて1時間以内で終了し、簡便かつ有用なアッセイ系であると考えられる。

Protein において, アスパラギンやアスパラギン acid residue は, heterosexualized やラセミ化をvery にrise こしやすく, そのdegradation に companion L-イソアスパラギン草(IsoAsp)およびD-アスパラギン acid(D-Asp)が生じることが知られている. This study focuses on the heterosexualization of acidic residues in proteins. The function of protein in the cell is affected by the function of protein, which affects the function of protein in the cell and the function of repair enzyme and protein. L-isoaspartate/D-aspartate O-methyltransferase (PIMT) is used to inhibit cell production and analysis.そのResults, PIMT growth inhibitor strain においてEGF stimulation によるMEK およびそのdegradation であるERK のリンacidification のhyperactivity およびhold 続が cognize められた.そこで时に、MEKの上流であるRafのリンacidificationについてanalyticsを行ったところ, the same PIMT inhibitor strain においてリン acidified hyperactive がidentification められた. Now, the EGF is abnormally high and the EGF is abnormally high. The activity of PIMT in cells was measured using the open test system. Enzyme reaction conditions, HPLC dissolution conditions, results, 荍光ラベルしたisoAs p Contains the ペプチドおよびそのメチル成bodyをseparation検出する SIMPLE なアッセイSystemのEstablishmentに Successした.さらに, cell extract liquid was used いた実においても, simple 単な pretreatment を行うことにより, PIMT activity was measured and できることを was confirmed. This is a complete project that can be completed within 1 time, a simple and useful system, and a test system.

项目成果

期刊论文数量（9）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Overexpression of Ss12p confers resistance to adriamycin and actinomycin D in Saccharomyces cerevisiae.

Ss12p 的过度表达赋予酿酒酵母对阿霉素和放线菌素 D 的抗性。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Biochem Biophys Res Commun. 314(3)
影响因子：
0
作者：
Furuchi;Takemitsu
通讯作者：
Takemitsu

A Novel L-glutamate transporter inhibitor reveals endogenous D-aspartate homeostasis in rat pheochromocytoma MPT1 cells.

一种新型 L-谷氨酸转运蛋白抑制剂揭示了大鼠嗜铬细胞瘤 MPT1 细胞中的内源性 D-天冬氨酸稳态。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Life Sciences 76
影响因子：
0
作者：
Y.Okada^*;Y.Sano;T.Kaneko;I.Abe;H.Noguchi;K.Ito;K.Shimamoto;O.Boudker;Y.Takayasu;D.B.Re;K.Shimamoto;茂里康;S.Tsukada;H.Koyama
通讯作者：
H.Koyama

Free D-aspartate in mammals