蛋白質の異性化が細胞内情報伝達に及ぼす影響の解析

蛋白质异构化对细胞内信号传递的影响分析

• 批准号: 16790061
• 负责人: 古地 壯光
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790061/
• 关键词: アスパラギン酸; アスパラギン; PIMT; 異性化; ラセミ化

蛋白質において、アスパラギンやアスパラギン酸残基は、異性化やラセミ化を非常に起こしやすく、その劣化に伴いL-イソアスパラギン酸(IsoAsp)およびD-アスパラギン酸(D-Asp)が生じることが知られている。本研究では、蛋白質中のアスパラギンやアスパラギン酸残基の異性化ないしラセミ化が細胞内の蛋白質機能に及ぼす影響に関して、その修復酵素であるprotein L-isoaspartate/D-aspartate O-methyltransferase(PIMT)の発現抑制細胞を作製し、それを用いることにより解析を行った。その結果、PIMT発現抑制株においてEGF刺激によるMEKおよびその下流であるERKのリン酸化の亢進および持続が認められた。そこで次に、MEKの上流であるRafのリン酸化について解析を行ったところ、同様にPIMT発現抑制株においてリン酸化の亢進が認められた。現在は、EGFシグナル伝達系に異常亢進が生じるメカニズムの解明に向け、更なる解析を行っている。また、細胞内のPIMT活性を測定する系の開発も試みた。酵素反応条件およびHPLCの溶出条件を種々検討した結果、蛍光ラベルしたisoAsp含有ペプチドおよびそのメチル化体を分離検出する簡便なアッセイ系の確立に成功した。さらに、細胞抽出液を用いた実験においても、簡単な前処理を行うことにより、PIMT活性が測定できることを確認した。本系は全工程を含めて1時間以内で終了し、簡便かつ有用なアッセイ系であると考えられる。

在蛋白质中，天冬酸酯和天冬氨酸残基高度容易出现异构化和种族化，并且众所周知，L-异肥大酸（ISOASP）和D-天冬氨酸（D-ASP）是由于其恶化而产生的。在这项研究中，制备了天冬酰胺和天冬氨酸残基在蛋白质中的异构化或种族化对细胞中蛋白质功能的影响，并通过使用细胞抑制蛋白质L-异硫酸蛋白质天冬氨酸/D-天冬氨酸O-甲基转移酶（PIMT）的表达。结果，PIMT表达抑制菌株表明，通过EGF刺激，MEK及其下游ERK的磷酸化增加和持久性。接下来，进行了MEK上游的RAF的磷酸化，同样，在PIMT表达抑制菌株中，磷酸化增加了。当前，正在进行进一步的分析，以阐明EGF信号系统中发生异常多动症的机制。我们还尝试开发一种测量细胞中PIMT活性的系统。经过对酶反应条件和HPLC的洗脱条件的各种研究后，我们成功地建立了一个简单的测定系统，用于分离和检测荧光标记的含ISOASP的肽及其甲基化的身体。此外，可以通过在使用细胞提取物的实验中进行简单的预处理来测量PIMT活性。该系统（包括所有步骤）可以在不到1小时内完成，被认为是一个方便且有用的测定系统。

项目成果

Overexpression of Ss12p confers resistance to adriamycin and actinomycin D in Saccharomyces cerevisiae.

Ss12p 的过度表达赋予酿酒酵母对阿霉素和放线菌素 D 的抗性。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Biochem Biophys Res Commun. 314(3)
• 作者: Furuchi;Takemitsu
• 通讯作者: Takemitsu

A Novel L-glutamate transporter inhibitor reveals endogenous D-aspartate homeostasis in rat pheochromocytoma MPT1 cells.

一种新型 L-谷氨酸转运蛋白抑制剂揭示了大鼠嗜铬细胞瘤 MPT1 细胞中的内源性 D-天冬氨酸稳态。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Life Sciences 76
• 作者: Y.Okada^*;Y.Sano;T.Kaneko;I.Abe;H.Noguchi;K.Ito;K.Shimamoto;O.Boudker;Y.Takayasu;D.B.Re;K.Shimamoto;茂里 康;S.Tsukada;H.Koyama
• 通讯作者: H.Koyama

L-glutamate in the extracellular space regulates endogenous D-aspartate homeostasis in rat pheochromocytoma MPT1 cells

• DOI: 10.1016/j.abb.2004.01.016
• 发表时间: 2004-04-01
• 期刊: ARCHIVES OF BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
• 影响因子: 3.9
• 作者: Adachi, M;Koyama, H;Homma, H
• 通讯作者: Homma, H

Functions of yeast helicase Ssl2p that are essential for viability are also involved in protection from the toxicity of adriamycin

• DOI: 10.1093/nar/gkh582
• 发表时间: 2004-04-01
• 期刊: NUCLEIC ACIDS RESEARCH
• 影响因子: 14.9
• 作者: Furuchi, T;Takahashi, T;Naganuma, A
• 通讯作者: Naganuma, A

D-Glutamic acid-induced muscle contraction in the silkworm, Bombyx mori.

D-谷氨酸诱导家蚕肌肉收缩。

• 发表时间: 2005
• 期刊: J Biochem (Tokyo) 137(2)
• 作者: Sekimizu;Kazuhisa
• 通讯作者: Kazuhisa