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特異な反応・基質認識機構を有する糖質関連酵素の構造機能研究

具有独特反应和底物识别机制的碳水化合物相关酶的结构和功能研究

基本信息

批准号：
17780079
负责人：
伏信進矢
金额：
$ 2.3万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

GH54アラビノフラノシダーゼのアラビノース結合ドメイン(CBM42)の結合サイトの構造・機能解析を行った。今年度は、不溶性基質に対する動力学解析を行った結果、結合サイトの破壊変異体では著しく反応速度が低下することが明らかになった。また、各種の糖質との阻害実験、フロンタルアフィニティクロマトグラフィー測定、アラビノオリゴ糖との複合体の結晶構造解析から、CBM42が基質アラビノキシランのアラビノフラノース側鎖に特異的に結合することが明らかになった(Biochem.J.誌に掲載)。GH94セロビオースボスホリラーゼでは、昨年度までに決定した2種類の複合体構造(Biochem.J.誌に掲載)を基に分子モデリングを行い、活性中心付近の残基を置換した変異体を約30種類作成した。その中から、ラクトース分解活性が約2倍に向上した変異体が得られた。反応産物にガラクトース1リン酸を確認したことから、この変異体はサブサイト-1にガラクトースを結合できる能力が高いと考えられる(論文執筆中)。その他の、特異な基質認識機構を有する酵素として、白色腐朽菌由来β-グルコシダーゼの結晶構造を決定した。白色腐朽菌は木材を分解する酵素を多数分泌する菌として有名であるが、本酵素は菌体内に存在し、バイオマス分解産物の資化およびその他の配糖体の分解に関わると考えられている。本酵素の結晶構造から、サブサイト+1が既知のβ-グルコシダーゼと全く異なることが明らかになり、特異な基質認識機構が解明された(FEBS.Lett.誌に掲載)。なお、本課題はこれで最終年度になるため、本課題の成果を中心にまとめた総説を発表予定である(J.Appl.Glycosci.誌で印刷中。2007年度54巻2号に掲載予定)。

GH54 is a high-quality, high-quality product. The results of this year's kinetic analysis of insoluble matrices, combined with the changes in the substrate, make it clear that the reaction speed is lower. The analysis of crystal structure of complex of carbohydrate and CBM42 is described in Biochem.J.(Biochem.). GH94 has been identified as two types of complex structures (Biochem.J.), and about 30 types of complex structures have been identified as residues near the active center. The decomposition activity of the compound is about twice as high as that of the compound. The reaction product is identified by the reaction product. The reaction product is identified by the reaction product. The reaction product is identified by the reaction product. Other, specific substrate recognition mechanisms include enzymes, and the origin of white rot bacteria is determined by the crystal structure of β-crystals. The white rot fungus secretes most of the enzymes that decompose wood. The enzyme exists in the fungus and is related to the decomposition of other glycosides. The crystal structure of this enzyme is described in FEBS. Lett. Journal. The final year of this project is now in print. 2007 - 2007 (2007 - 2007).

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Structural basis for the specificity of the reducing end xylose-releasing exo-oligoxylanase from Bacillus halodurans C-125

DOI：
10.1074/jbc.m413693200
发表时间：
2005-04-29
期刊：
JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
影响因子：
4.8
作者：
Fushinobu, S;Hidaka, M;Kitaoka, M
通讯作者：
Kitaoka, M

Crystallization and preliminary X-ray analysis of cytosolic α-mannosidase from Thermotoga maritima

海栖热袍菌胞浆 α-甘露糖苷酶的结晶和初步 X 射线分析

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Acta Cryst. Section F 62・2
影响因子：
0
作者：
Satsu;H.;上野川修一;半田宏;Y.Nijikken et al.;M.Hidaka et al.;A.Miyanaga et al.;Miyanaga et al.;Koseki et al.;Koseki et al.;M.Nakajima et al.
通讯作者：
M.Nakajima et al.

Crystal structure of GH54 α -L-arabinofuranosidase and unique function of CBM42 attached to it

GH54α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶的晶体结构及其附着的CBM42的独特功能

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
J.Appl.Glycosci. 53・2
影响因子：
0
作者：
Satsu;H.;上野川修一;半田宏;Y.Nijikken et al.;M.Hidaka et al.;A.Miyanaga et al.;Miyanaga et al.
通讯作者：
Miyanaga et al.

Strucatural dissection of the reaction mechanism of cellobiose phosphorylase

纤维二糖磷酸化酶反应机制的结构剖析

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Biochem.J. 398・1
影响因子：
0
作者：
Satsu;H.;上野川修一;半田宏;Y.Nijikken et al.;M.Hidaka et al.
通讯作者：
M.Hidaka et al.

N-Linked oligosaccharides of Aspergillus awamori feruloyl esterase are important for thermostability and catalysis

泡盛曲霉阿魏酸酯酶的 N-连接寡糖对于热稳定性和催化很重要

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Biosci.Biotechnol.Biochem. 70・10
影响因子：
0
作者：
Satsu;H.;上野川修一;半田宏;Y.Nijikken et al.;M.Hidaka et al.;A.Miyanaga et al.;Miyanaga et al.;Koseki et al.;Koseki et al.
通讯作者：
Koseki et al.