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重度知的障害の染色体転座部位に局在するPLEKHA5の機能解析

重度智力障碍染色体易位位点 PLEKHA5 的功能分析

基本信息

批准号：
17790087
负责人：
山田憲一郎
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Institute for Developmental Research, Aichi Human Service Center
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790087/
关键词：
PLEKHA5 シグナル伝達遺伝子脳神経疾患脳・神経蛋白質遣伝子

项目摘要

昨年までの研究において、PLEKHA5が重度知的障害の症例の染色体転座部位に局在することを明らかにした。PLEKHA5が本症の病因遺伝子であることが示唆された。本年度は、PLEKHA5の脳神経細胞における役割と、PLEKHA5の異常による本症の病態を明らかにする目的で、以下の研究を行った。1)マウス海馬初代神経培養細胞におけるPlekha5の発現抑制の影響マウスPlekha5の発現を抑制するsiRNAを産生する発現ベクター(pSUPER-Plekha5)を作製し、胎生17.5日(E17.5)のマウス海馬初代神経培養細胞に導入し、16、24、48、72時間後と5日後に生存細胞数を測定した。Plekha5の発現が抑制された神経細胞では、コントロールに比較して顕著な生存細胞数の減少(72時間後にコントロールの約20%)が見られた。さらに生存していた細胞の形態を解析したところ、Plekha5を発現抑制した神経細胞では、コントロールに比較して細胞体の長径よりも短い神経突起を持つ神経細胞の割合が顕著に高くなっていた(コントロール細胞:7.5%、Plekha5発現抑制細胞:44.5%)。2)Plekha5全長cDNAの単離Plekha5はPHドメインを持ち、フォスファチジルイノシトールリン脂質(PIP)に結合することが予想される。Plekha5蛋白質のPIP結合特異性を明らかにするために、まず完全長の同遺伝子のcDNAの単離を行った。マウスcDNAライブラリーよりPCR法を用いてPlekha5 cDNAを増幅した。その結果、多くのスプライシングヴァリアントが同定されたが、最終的に本研究中にNCBIデータベースにおいて新しく発表となった完全長のcDNA(3810bp、1270アミノ酸をコード)を単離した。

In the past few years, PLEKHA5 has been found to be responsible for the development of severe disorders at chromosomal loci. PLEKHA5 is the cause of this disease. This year, we conducted the following research on PLEKHA5's neuronal activity, PLEKHA5's abnormal activity, and the pathogenesis of this disease. 1) Inhibition of Plekha5 development in cultured hippocampal neurons by siRNA production at 17.5 days after birth (E17.5). Plekha5 production was inhibited by a decrease in the number of viable cells (about 20% of cells after 72 hours). In addition, Plekha5 was inhibited by morphological analysis of survival cells. Compared with the long diameter of cell body, the short diameter of neuronal processes and the high degree of cleavage of neuronal cells (Plekha5 inhibited cells:7.5% and Plekha5 inhibited cells:44.5%). 2)Plekha5 full-length cDNA isolated from Plekha5 is expected to be able to bind to a protein called PIP. Plekha5 protein PIP binding specificity is clearly identified, and the cDNA sequence of the complete cDNA sequence is identified. Plekha5 cDNA amplification by PCR In this study, NCBI was used to develop a novel cDNA sequence with a full-length cDNA(3810bp, 1270 bp).