小胞体ストレスとマロリー体形成の関与について

关于内质网应激和马洛里体形成的参与

• 批准号: 17790472
• 负责人: 花田 慎一郎
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790472/
• 关键词: マロリー体; ケラチン; 小胞体ストレス; 酸化ストレス; ユビギチン・プロテアソーム; アグリソーム; サイトケラチン

(背景用的)アルコール性肝障害をはじめとする種々の肝疾患では、細胞内凝集体であるマロリー体が高頻度に観察される。マロリー体は一種のアグリソームと推測されるが、その形成機序、細胞生物学的意義は不明である。今回我々は種々の肝疾患において、酸化ストレスが肝細胞における小胞体ストレスを惹起し、小胞体での蛋白質品質管理機構が障害された結果、異常蛋白質が産生過剰となり、マロリー体が形成されるという仮説を立てた。(方法)ヒト肝癌細胞から得られた肝細胞株(Huh7細胞)およびヒト不死化肝綱胞'OUMS-29)にグルコースオキシダーゼならびにプロテアソーム阻害剤であるALLNを同時投与し、凝集体形成の有無を検討した。凝集体の形態的特徴を明らかにするため熱ショック蛋白、ガンマ・チュブリン、ユビキチン、サイトケラチンの免疫染色を行った。免疫染色に関しては野生型ケラチン18を遺伝子導入した細胞も用いた。さらに凝集体の微細構造を評価するため電子顕微鏡にて観察した。凝集体形成に小胞体ストレスが関与しているかどうかを検討するため、ストレスマーカーであるXBP・1、 Bip、リン酸化PERKの発現をウェスタンブロッティングにて評価した。(結果)グルコースオキシダーゼを培養液中に投与した結果H202の持続的発現がみられた。抗酸化剤であるN-acetyl-cysteine(NAC)を前投与した結果H202産生は減少していた。Huh7、OUMS-29細胞にグルコースオキシダーゼと少量のALLNを同時投与した結果有意に凝集体形成細胞が増加していた。NACを前投与すると凝集体形成は抑制された。免疫染色の結果、この凝集体は熱ショック蛋白、ユビキチン、p62と共在したことからマロリー体の形態的特徴を持つことが分かった。またガンマ・チュブリン、熱ショック蛋白90も共在したことから神経変性疾患でみられるアグリソームとの共通点も認められた。電子顕微鏡による観察では、凝集体は核近傍に存在し、周囲をケラチンと思われる線維性構造物が囲んでいた。凝集体を有する細胞ではしばしば拡張した小胞体や、electron-dense depositを内包するミトコンドリアが認められた。ウェスタンブロッティングの結果グルコースオキシダーゼ、ALLN投与時、小胞体ストレスマーカーは発現が増加していた。一方、小胞体ストレスを減弱させるchemical chaperoneである4-phenylbutyrate(PBA)を前投与するとストレスマーカーの発現低下が見られ、凝集体形成も抑制されていた。(考察)今回我々は酸化ストレスが小胞体ストレスを惹起し、細胞内凝集体形成に直接関与していることを明らかにした。種々の肝疾患において持続的酸化ストレスがマロリー体形成に関与している可能性がある。本実験結果は2007年度Journal of Hepatology誌に掲載予定である。

(For background) Liver disease, liver disease, and intracellular aggregates, high-frequency liver disease. It is a kind of のアグリソームととされるが, その formation mechanism, and the significance of cell biology is unknown. This time I will treat liver disease, acidification of liver cells, small cell body, and small cell body protein. The results of the quality control agency's failure, the abnormal protein production, and the malformation of the body are the results of the failure. (Method) Hepatocellular carcinoma cell line, Hepatocyte cell line (Huh7 cell), Immortalized liver cell line 'OUMS-29), Hepatitisコースオキシダーゼならびにプロテアソーム hinder 剤であるALLNを simultaneously throw し, the presence or absence of aggregate formation を検した. The special ゴを明らかにするため热ショックprotein, ガンマ in the form of agglomerate・チュブリン, ユビキチン, サイトケラチンのimmunostaining を行った. Immunostaining was carried out by introducing wild-type ケラチン18 をした cells into した cells. The microscopic structure of the condensed body is evaluated using an electronic microscope. The agglomerate is formed by small cell bodies, ストレスが关, and しているかどうかを検恙るため, ストレスマーカーであるXBP・1, Bip, リン acidified PERK の発 appear をウェスタンブロッティングにて 価した. (Result) When H202 was added to the culture medium of the グルコースオキシダーゼを, the results showed that H202 had the same effect. Pre-administration of antacid N-acetyl-cysteine ​​(NAC) results in a reduction in H202 production. Huh7 and OUMS-29 cells were injected with a small amount of ALLN at the same time, and the result was an increase in cells forming aggregates. Pre-administration of NAC also inhibits the formation of aggregates. Immunostaining results, このaggregate は热ショックprotein, ユビキチン, p62 It's a special form of したことからマロリーbody.またガンマ・チュブリン、热ショックprotein 90も合在したことかThere are common points among all the diseases of the Gods and diseases. Electron micromirror observation, existence of the core of agglomerates, and linear dimensional structures. The agglomerate has a small cell body and an electron-dense deposit. A When LLN is injected, the small cell body becomes larger and larger. On the one hand, small cell body ストレスを weakened させるchemical Chaperone 4-phenylbutyrate (PBA) is used to suppress the formation of aggregates and suppress the formation of aggregates. (Investigation) This time, the acidification of the ストレススストレスを caused by the acidification of the ストレスを and the formation of intracellular aggregates are directly related to the していることを明らかにした. This type of liver disease is related to the possibility of acidification and body formation of liver disease. The results of this publication will be published in the 2007 Journal of Hepatology.

项目成果

The Wilson disease protein ATP7B resides in the late endosomes with rab7 and the Niemann-Pick C1 protein

• DOI: 10.1016/s0002-9440(10)62272-9
• 发表时间: 2005-02-01
• 期刊: AMERICAN JOURNAL OF PATHOLOGY
• 影响因子: 6
• 作者: Harada, M;Masaru, H;Sata, M
• 通讯作者: Sata, M

Endothelial progenitor cell transplantation improves the survival following liver injury in mice

• DOI: 10.1053/j.gastro.2005.10.050
• 发表时间: 2006-02-01
• 期刊: GASTROENTEROLOGY
• 影响因子: 29.4
• 作者: Taniguchi, E;Kin, M;Sata, M
• 通讯作者: Sata, M

Keratin-containing inclusions affect cell morphology and distribution of cytosolic cellular components.

含角蛋白的内含物影响细胞形态和细胞质细胞成分的分布。

• DOI: 10.1016/j.yexcr.2004.12.009
• 发表时间: 2005
• 期刊: Experimental cell research.
• 作者: Hanada,Shinichiro;Harada,Masaru;Kumemura,Hiroto;Omary,MBishr;Kawaguchi,Takumi;Taniguchi,Eitaro;Koga,Hironori;Yoshida,Takafumi;Maeyama,Michiko;Baba,Shinji;Ueno,Takato;Sata,Michio
• 通讯作者: Sata,Michio

Oxidative Stress Induces the Endoplasmic Reticulum Stress and Formation of Cytosolic Inclusions Composed of Cytokeratin in Cultured Human Hepatome-derived Cells

氧化应激诱导人肝细胞来源的内质网应激和细胞角蛋白组成的胞质包涵体的形成

• 发表时间: 2005
• 期刊: Hepatology 42;4
• 作者: Eitaro Taniguchi;Shinichiro Hanada et al.;Shinichiro Hanada et al.
• 通讯作者: Shinichiro Hanada et al.

Cholestasis in a rat model of graft-versus-host disease is accompanied by alteration of the expression and distribution of tight-junction-associated proteins.

• DOI: 10.3892/ijmm.15.3.431
• 发表时间: 2005-03
• 期刊: International journal of molecular medicine
• 影响因子: 5.4
• 作者: K. Sasatomi;S. Sakisaka;T. Kawaguchi;S. Hanada;E. Taniguchi;H. Koga;M. Harada;M. Sata