転写終結複合体のX線結晶構造解析

转录终止复合物的X射线晶体结构分析

• 批准号: 17770083
• 负责人: 関根 俊一
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17770083/
• 关键词: 転写; RNAポリメラーゼ; 転写終結; X線結晶構造解析; 立体構造; Rho

高度好熱菌の菌体からRNAポリメラーゼ(コア酵素およびホロ酵素)を単離し、高純度に精製した。転写休止ないし終結に関与する高度好熱菌の転写因子(NusA、NusGおよびRho)について、大腸菌内での大量発現系を構築し、高純度のサンプルとして精製する方法を確立した。これらの精製タンパク質と高度好熱菌から調製したRNAポリメラーゼを組み合わせたin vitroの転写終結アッセイ系を確立した。転写終結因子Rhoについて、単独およびNusGとの複合体の結晶化に成功した。大型放射光施設SPring-8を用いて2.8Åのデータセットの収集に成功した。大腸菌Rhoの構造を検索モデルにした分子置換法での位相決定を試みたが、解は得られなかった。高度好熱菌のRhoは既知構造とは異なるコンフォメーションをとっていると考えられる。現在MAD法での位相決定を行うために、セレノメチオニン置換体タンパク質の結晶化を行っている。RNAポリメラーゼによる転写の終結ないし休止を引き起こすRNAを結合した複合体(転写終結ないし休止複合体)を再構成するための核酸(RNAおよびDNA)の配列のデザインを行い、複合体のin vitro再構成に成功した。ゲルシフトアッセイ等により、再構成した複合体が生物学的に意味のある複合体に相当することを示した。これらの複合体の結晶化に着手し、再現性よく単結晶を得ることに成功している。特に休止複合体については、シンクロトロン放射光をもちいて測定したところ、4Åを超える分解能の回折が得られた。構造解明にはいま少し時間を要するが、核酸配列の最適化と結晶化条件の改良により、より高質のデータを取得し、高分解能の構造解明ができると期待できる。

High-quality bacteria, RNA bacteria, high-temperature, high- This is the same as that of high-level bacteria (NusA, NusG bacteria, Rho), high-temperature bacteria, high-temperature bacteria, high-temperature bacteria, In order to make sure that you have a high degree of health, you need to know that you have a high level of bacteria, so that you can make sure that you have a high level of bacteria. You need to make sure that you have a high degree of success. You need to make sure that you have a high degree of success. You need to make sure that you have a high degree of success. You need to make sure that you have a good RNA. The Rho factor was successfully crystallized and the NusG complex was successfully crystallized. For large-scale radioluminescent construction, the SPring-8 system is successful. Rho was used to determine the phase of the molecule in order to determine the molecular structure. It is known that the height of the bacteria is very good. The Rho is very good. It is known that there is a problem in the construction of the bacteria. Now in the MAD method, the phase determines the performance of the system, and the crystallization of the system. In RNA, the combination of RNA and DNA was induced to form a sequence of nucleic acids (RNA nucleic acids), and the complex was then constructed into a "success". The biological meaning of the complex is quite different from the biological meaning of the complex. After the complex was crystallized, and then the results of the sexual transformation were confirmed, we got the successful result. This is a special way to stop the synthesis of the complex, to measure the temperature of the complex, to determine the temperature of the complex, and to determine that the decomposition of the complex can be broken back. The optimization of nucleic acid sequencing, the improvement of the crystallization conditions of nucleic acid alignment, the improvement of the crystallization conditions of nucleic acid, the determination of high temperature, and the expectation of high decomposition can be obtained by high decomposition energy.