ショウジョウバエ貪食受容体Draperに認識されるアポトーシス細胞表層分子の同定

前年度の末に、本研究課題の遂行によって得られた成果をまとめた論文を投稿した。審査員により多くの追加実験を要求され、本年度は主にそれらの実験を行い、以下に箇条書きにした成果が得られた。それにより、前年度までの結果により導かれた結論をより強く主張できると考えられた。・prtp,drprおよびprtp,ced-6の二重欠損体を作成し、胚のアポトーシス細胞貪食程度を解析した。其の結果、貪食程度は単独欠損体のものとほぼ同じであった。したがって、prtpはdrpr,ced-6と同じシグナル伝達経路で働いていることが示唆された。・prtpとアポトーシス細胞貪食に関与するさまざまな遺伝子との二重ヘテロ体を作製して貪食を調べた(genetic interaction)。その結果、prptはRacとgenetic interactionを示すことがわかった。これは、prtpが細胞骨格の変動を直接導く因子を活性化することを示唆する。・prpt欠損体の全身でprtpを過剰発現させ、アポトーシス細胞貪食が回復するか調べた。期待通り、貪食は野生型と同じ程度まで回復した。これは、prtp欠損体におけるアポトーシス細胞貪食低下の原因がprtpの欠損にあることを明確に証明する結果である。さらに、欠損体のヘモサイトのみにprtpを発現させた胚の貪食は回復しなかったことから、prtpはヘモサイトでは働いていないことが示唆された。・アポトーシス細胞表面へのprtpの出現のタイムコースを調べた。その結果、prtpの出現はカスパーゼの活性化やアネキシンVの露出よりも遅く、核の断片化とほぼ同じ時期であることがわかった。なお、prtpの出現はz-VAD-fmkの添加により阻害されたことから、出現はカスパーゼ依存であることもわかった。さらにprtpの出現は胚のアポトーシス細胞でも観察された。

前年度の末に、本研究課題の遂行によって得られた成果をまとめた論文を投稿した。審査員により多くの追加実験を要求され、本年度は主にそれらの実験を行い、以下に箇条書きにした成果が得られた。それにより、前年度までの結果により導かれた結論をより強く主張できると考えられた。・prtp,drprおよびprtp,ced-6の二重欠損体を作成し、胚のアポトーシス細胞貪食程度を解析した。其の結果、貪食程度は単独欠損体のものとほぼ同じであった。したがって、prtpはdrpr,ced-6と同じシグナル伝達経路で働いていることが示唆された。・prtpとアポトーシス細胞貪食に関与するさまざまな遺伝子との二重ヘテロ体を作製して貪食を調べた(genetic interaction)。その結果、prptはRacとgenetic interactionを示すことがわかった。これは、prtpが細胞骨格の変動を直接導く因子を活性化することを示唆する。・prpt欠損体の全身でprtpを過剰発現させ、アポトーシス細胞貪食が回復するか調べた。期待通り、貪食は野生型と同じ程度まで回復した。これは、prtp欠損体におけるアポトーシス細胞貪食低下の原因がprtpの欠損にあることを明確に証明する結果である。さらに、欠損体のヘモサイトのみにprtpを発現させた胚の貪食は回復しなかったことから、prtpはヘモサイトでは働いていないことが示唆された。・アポトーシス細胞表面へのprtpの出現のタイムコースを調べた。その結果、prtpの出現はカスパーゼの活性化やアネキシンVの露出よりも遅く、核の断片化とほぼ同じ時期であることがわかった。なお、prtpの出現はz-VAD-fmkの添加により阻害されたことから、出現はカスパーゼ依存であることもわかった。さらにprtpの出現は胚のアポトーシス細胞でも観察された。