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ミオシン重鎖アイソフォームから探る魚類の筋形成の分子メカニズム

从肌球蛋白重链亚型探索鱼肌肉形成的分子机制

基本信息

批准号：
18780160
负责人：
木下滋晴
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

メダカの筋形成過程で発現する主要なミオシン重鎖(myosin heavy chain, MYH)アイソフォームであるmMYH_<L1>、mMYH_<L2>およびmMYH_<emb1>につき、RACE法により転写開始点を同定した。次に、転写開始点から5'上流の配列をゲノムデータベースから抽出し、他生物種の相同領域とのホモロジー解析を行ったところ、mMYH_<emb1>の5'上流1kb付近にトラフグ胚体で発現するMYH_<M2528-2>の5'上流と高い相同性を示す領域が得られた。当該領域を含むmMYH_<emb1>の5'上流2kbをGFPをレポーターとするベクターに連結し、メダカ受精卵に導入したところ、メダカ胚の水平筋隔に限定したGFPの発現が観察された。同様の発現はゼブラフィッシュでも観察された。こうしたGFP陽性細胞の分布は遅筋型MYHを発現するmuscle pioneerのものと類似するが、特異抗体を用いた免疫染色の結果、GFP陽性細胞はmuscle pioneerのマーカーであるengrailedを発現しておらず、mMYH_<emb1>を発現する筋細胞の性状や発生の系譜に興味がもたれた。また、mMYH_<L1>およびmMYH_<L2>については、それぞれ翻訳開始点の5'上流2.6kbおよび4kbを連結したレポーターベクターを導入することで、メダカおよびゼブラフィッシュ胚の速筋でGFPの発現が観察された。これら結果から、MYHの5'上流には魚類の異なる筋組織での発現を制御するシス制御領域が存在することが示された。また、昨年度は筋特異的タンパク質の転写制御に関与する筋分化制御因子myoD familyをメダカからクローニングし、その発現パターンのプロファイリングを行った。今年度はこれら筋分化制御因子の活性調節に関与することがほ乳類で報告されているヒストンのアセチル化について検討した。メダカおよびゼブラフィッシュ受精卵をヒストン脱アセチル化酵素の阻害剤であるバロプロ酸で処理したところ、発生の遅滞や体幹部の屈曲が観察された。特異抗体を用いた組織学的解析により、これら胚では本来表皮直下に単層を形成する遅筋細胞が重層化する異常が観察された。

Myosin heavy chain (MYH) is the key to the development of myosin tendon formation. The MYH_, MYH_, <L1>MYH<L2>_<emb1>and RACE methods are used to determine the starting point of myosin heavy chain. Next, write the start point from the 5'upper stream of the array, extract the same domain of other species, and analyze the same domain. mMYH<emb1>_5' upper stream of 1kb is close to the embryo. MYH_5 <M2528-2>'upper stream of identity is displayed in the domain. When the domain contains mMYH_<emb1>5'upstream 2kb GFP, it is possible to detect the presence of GFP in the domain by linking the domain to the zygote and limiting the presence of GFP in the domain. The same is true for the development of the disease. The distribution of GFP positive cells was similar to that of muscle-type MYH. The results of immunostaining with specific antibodies showed that GFP positive cells were involved in the development of muscle-type MYH<emb1>. MMYH<L1>_T_T_T<L2>. The results showed that the 5'upper reaches of MYH had no significant effect on the development of fish muscle tissue. In the past year, the quality of the tendon was controlled by the tendon differentiation control factor myoD family. This year, we have reviewed the implications of this report for the regulation of the activity of muscle differentiation-controlling factors and the integration of these factors. The enzyme inhibitor is used to detect the growth and development of embryos. Specific antibodies were used in histological analysis to detect abnormalities in the formation of layers directly below the epidermis.