神経変性疾患におけるグルタメイトシグナルによる神経系幹細胞の増殖・分化制御

神经退行性疾病中谷氨酸信号对神经干细胞增殖和分化的控制

• 批准号: 18790131
• 负责人: 米山 雅紀
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Setsunan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790131/
• 关键词: 神経系幹細胞; 神経系前駆細胞; グルタメイト受容体; NMDA受容体; グリシン; Neurosphere法; 神経新生; 細胞増殖; 細胞死

本研究では、神経新生に対するグルタメイト受容体による制御機構を明らかにするため、マウス海馬由来培養神経系前駆細胞の増殖に対するN-methyl-D-aspartate(NMDA)受容体グリシン結合部位特異的阻害薬であるSM31900の影響について解析した。胎生15日齢マウス脳内から海馬を単離し、酵素処理後、得られた細胞懸濁液についてDMEM/F12を基本とする塩基性線維芽細胞増殖因子(bFGF)および上皮細胞増殖因子(EGF)を添加した培地で9日間培養を行った。SM31900は培養直後から添加し9日間暴露した。また、培養神経系前駆細胞の増殖能はMTT assayおよびneurosphere assayにより解析した。Neurosphere assayでは、培養過程で形成されたneurosphere数および大きさを測定した。さらに、継代培養した細胞を用いて、細胞障害に対するSM31900の影響をHoechst 33342染色により解析した。マウス脳内海馬から調整した細胞をbFGFおよびEGF存在下で培養したところ、neurosphereの形成が観察された。同実験条件下で、培養初期からifenprodilを液体培地に添加したところ、培養2日目からMTT還元能の有意な減少が認められ、その減少は9日目まで持続した。さらに、培養9日目でneurosphere assayを行ったところ、SM31900暴露群では対昭群に比べneurosphere数および大きさの著しい減少が認められた。また、SM31900による細胞増殖抑制効果はグリシン結合部位アゴニストであるD-serineにより拮抗された。したがって、SM31900が培養神経系前駆細胞の増殖を抑制したことから、神経系前駆細胞の増殖にNMDA受容体グリシン結合部位が関与する可能性が示唆される。

In this study, we analyzed the effects of SM31900 on the growth of hippocampus derived cultured neurons by N-methyl-D-aspartate(NMDA) receptor binding site-specific inhibitors. After 15 days of fetal growth, hippocampus cells were isolated and enzyme treated. DMEM/F12 was added to the suspension. Basic fibroblast growth factor (bFGF) and epithelial cell growth factor (EGF) were added to the suspension. SM31900 is cultured straight after adding 9 days of exposure. The proliferation of cultured neurons was analyzed by MTT assay and neurosphere assay. Neurosphere assay is used to determine the number of neurospheres formed during incubation. The effect of SM31900 on cell culture and cell damage was analyzed by Hoechst 33342 staining. In the presence of bFGF and EGF, the formation of neurospheres in hippocampus was observed. Under the same conditions, at the beginning of the culture, the MTT activity was reduced intentionally by adding ifenprodil to the culture medium, and at the end of the culture period, the MTT activity was reduced intentionally. 9 days after incubation, the number of SM31900 exposed groups decreased significantly compared with the number of SM31900 exposed groups. SM31900 is a potent inhibitor of cell proliferation. The possibility that SM31900 inhibits the proliferation of cultured neuronal cells and that NMDA receptor binding sites are associated with the proliferation of neuronal cells is discussed.

项目成果

副腎摘出によるトリメチルスズ誘発性神経細胞障害の増強メカニズムの解析

肾上腺切除增强三甲基锡所致神经元损伤的机制分析

• 发表时间: 2008
• 作者: 樋口 桂;ら
• 通讯作者: ら

海馬歯状回障害後の神経新生におけるNMDA受容体の役割

NMDA 受体在海马齿状回损伤后神经发生中的作用

• 发表时间: 2008
• 作者: 後藤 由佳;ら
• 通讯作者: ら

Activation of GABAA receptors facilitates astroglial differentiation induced by ciliary. neurotrophic factor in neural progenitors isolated from fetal rat brain.

GABAA 受体的激活促进纤毛诱导的星形胶质细胞分化。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Journal of Neurochemistry 100
• 作者: Masanori Yoneyama;Masaki Fukui;Noritaka Nakamichi;Tomoya Kitayama;Hideo Taniura;Yukio Yoneda
• 通讯作者: Yukio Yoneda

Changes in NMDA receptor signals in the dentate gyrus after damage induced by trimethyltin

三甲基锡损伤后齿状回NMDA受体信号的变化

• 发表时间: 2008
• 作者: Koichi Kawada;ら
• 通讯作者: ら

神経系前駆細胞の増殖におけるNMDA受容体の役割

NMDA 受体在神经祖细胞增殖中的作用

• 发表时间: 2007
• 作者: 後藤 由佳;米山 雅紀;荻田 喜代一
• 通讯作者: 荻田 喜代一