受容体間ヘテロ多量体形成:大腸菌でのランダム変異と共鳴エネルギー転移の応用

受体间异多聚体形成：随机突变和共振能量转移在大肠杆菌中的应用

• 批准号: 07J01716
• 负责人: 鈴木 登紀子
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tohoku University (2008-2009)Gakushuin University (2007)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J01716/
• 关键词: Gタンパク質共役型受容体; アデノシン受容体; P2Y受容体; BRET; ダイマー; 多量体化インクーフェイス; GPCR; A1アデノシン受容体; ダイマーインターフェイス; 膜貫通領域; site-directed mutagenesis; TM4 Trp; 分子モデリング

現在臨床で用いられている多くの薬のターゲットであるGタンパク質共役型受容体は、多量体で機能するという報告が活発になされている。生体内で機能する詳細なメカニズムを解明する上で、多量体形成インターフェイスの特定は重要である。前々年度は、Gタンパク質共役型受容体の一つであるA_1アデノシン受容体の多量体形成インターフェイスは4番目と5番目の細胞膜貫通領域に存在すると予想し、そこに含まれる4つのアミノ酸残基に関する部位特異的突然変異体を用いて免疫沈降を行ったが、予想に反して多量体形成に大きな変化は見られなかった。一方、変異体のリガンド結合はほぼ完全に消失するという興味深い結果を得たので、昨年度はそれらの結果をまとめて雑誌に投稿した。更に、査読者の指摘に従って、結果を再確認する実験を行った。すなわち、免疫沈降は界面活性剤により細胞膜を可溶化した状態で行うので、より自然な状態での多量体形成を測定するため、BRET(生体発光共鳴エネルギー転移)実験により、昨年度の結果を確認する結果を得た。また、変異体の細胞膜での発現は免疫染色し、共焦点顕微鏡による観察で確認していたが、細胞外領域のシステインをビオチン化し、ストレプトアビジンビーズにより細胞膜に存在するA_1受容体のみを単離する方法で、野性型と変異体で細胞膜移行に変化がないことも確認した。これらの確認実験により、昨年度立てた仮説をより強固に支持する証拠を得たので、再度論文にまとめて再投稿し、Joumal of Neurochemistryに掲載された。

Are now used in clinical で い ら れ て い る more く の 薬 の タ ー ゲ ッ ト で あ る G タ ン パ ク type let body は, total service quality of body function of で す る と い う live report が 発 に な さ れ て い る. Born in vivo で function す る detailed な メ カ ニ ズ ム を interpret す る で, more quantity body form イ ン タ ー フ ェ イ ス の specific は important で あ る. 々 before annual は, G タ ン パ ク type total service quality by let body の つ で あ る A_1 ア デ ノ シ ン by let body の much quantity body form イ ン タ ー フ ェ イ ス は four times yard と 5 times の cell membrane penetration domains exist に す る と think し, そ こ に containing ま れ る 4 つ の ア ミ ノ acid residues に masato す る site specific - suddenly variants を with い て immune sink を line っ た が, to To form a に large <s:1> な variation, see られな った った った. Side, - variant の リ ガ ン ド combining は ほ ぼ に disappear completely す る と い う tumblers deep い results た を の で, yesterday's annual は そ れ ら の results を ま と め て 雑 volunteers contribute に し た. Further に, check 読, point out に従って, result を, and then confirm する experiment を line った. す な わ ち, immune sink は interface active tonic に よ り membrane を solubilization し た state line で う の で, よ り natural state な で の quantity body to form more を determination す る た め, BRET (born 発 resonance light エ ネ ル ギ ー planning move) be 験 に よ を り, yesterday's annual の results す た を る results. ま た, - variant の membrane で の 発 は immune dyeing し now, total focus 顕 micromirror に よ る 観 examine で confirm し て い た が, extracellular domain の シ ス テ イ ン を ビ オ チ ン し, ス ト レ プ ト ア ビ ジ ン ビ ー ズ に よ り membrane に exist す る A_1 by let body の み を 単 from す で る method, wild type と - variant で transitional cell membrane に variations change が な い こ Youdaoplaceholder0 と confirm that た. こ れ ら の confirmation be 験 に よ り, yesterday's annual て た 仮 said を よ り strong に support す る card 拠 を have た の で, again thesis に ま と め て contribute to し, Joumal of Neurochemistry に first white jasmines load さ れ た.

项目成果

アデノシン受容体A_1RとP2Y_1R,P2Y_2Rのヘテロ多量体形成

腺苷受体 A_1R、P2Y_1R 和 P2Y_2R 的异多聚体形成

• 发表时间: 2009
• 作者: 鈴木登紀子;水野夏実;中田裕康;中畑則道
• 通讯作者: 中畑則道

Regulation of Receptor pharmacology by Hetero-oligomerization between A_1 Adenosine Receptor and P2Y_2 Receptor: Inhibition and Enhancement of G_<i/o-> and G_<q/11-> mediated Signal Transduction

A_1 腺苷受体和 P2Y_2 受体之间的异源寡聚化对受体药理学的调节：G_<i/o-> 和 G_<q/11-> 介导的信号转导的抑制和增强

• 发表时间: 2007
• 作者: 鈴木登紀子;難波一徳;山岸良介;金子寛生;中畑則道;中田裕康;鈴木 登紀子;Kazuki Kiyose;Tokiko Suzuki
• 通讯作者: Tokiko Suzuki

A_1アデノシン受容体のTM4の保存性の高いTrp残基の二量体形成及びリガンド結合活性への関与

A_1腺苷受体TM4高度保守的Trp残基参与二聚体形成和配体结合活性

• 发表时间: 2009
• 作者: 鈴木登紀子;難波一徳;山岸良介;金子寛生;中畑則道;中田裕康
• 通讯作者: 中田裕康

アデノシン受容体・P2Y受容体のヘテロ多量体形成調節機構

腺苷受体和P2Y受体异多聚体形成的调控机制

• 发表时间: 2009
• 作者: 鈴木登紀子;水野夏実;中畑則道
• 通讯作者: 中畑則道

A highly conserved tryptophan residue in the fourth transmembrane Dodoma of the A1 adenosine receptor is essential for ligand binding but not receptor homodimerization

A1 腺苷受体第四跨膜 Dodoma 中高度保守的色氨酸残基对于配体结合至关重要，但对于受体同二聚化不是必需的

• 发表时间: 2009
• 期刊: Journal of Neurochemistry 110
• 作者: Tokiko Suzuki;Kazunori Namba;Ryosuke Yamagishi;Hiroki Kaneko;Tatsuya Haga;Hiroyasu Nakata
• 通讯作者: Hiroyasu Nakata