RNA干渉法による慢性疼痛のメカニズム解明と遺伝子治療への応用

RNA干扰法阐明慢性疼痛机制及其在基因治疗中的应用

• 批准号: 19791082
• 负责人: 谷口 知史
• 金额: $ 2.28万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19791082/
• 关键词: 慢性疼痛; RNA干渉法; 遺伝子治療

目的 ラット後根神経節細胞の培養実験において,サイトカインシグナリングをターゲットに,siRNAをNucleofection法により遺伝子ノックダウンする事でラット後根神経節培養細胞におけるCOX-2,PGE2等の産生抑制を観察する。ラット後根神経節培養細胞にsiRNAを導入する実験(In Vitro)[ラット後根神経節培養細胞の単離]過去の文献通り(Fehrenbacher JC, et. al.Pain,2005),Sprague-Dawleyrat(150-200g)安楽死後,後根神経節を脊髄より取り出し,コラゲナーゼを含むHam'sF12培養液で2時間培養することにより細胞を単離した。PBSで洗浄後,NGFを含むpoly-D-IysineでコートされたHam's F12培養液で培養した。[siRNAの作成]NF-κBp50,IκBα kinase,p38MAPK,ERKをターゲットにしたsiRNA塩基配列作成した。[Nucleo fection法によるsiRNA導入,及び遺伝子発現抑制効果の確認]ラット後根神経節培養細胞を,Nucleofector solution内に2-5x10^6cells/100μ1に播種しsiRNA1.5μgを添付後,Amaxa siRNA nucleofection programに従いsiRNAの導入を行う。24時間又は48時間CO2インキュベーターにて培養後に細胞回収しノックダウンの効果を確認した。ラット後根神経節細胞におけるサイトカインシグナルノックダウンの効果IL1-β,TNF-αによりラット後根神経節培養細胞を刺激することにより,p38MAPKをノックダウンした群において,COX-2,iNOS,SubstancePの生成の抑制をELISA法等にて確認した。

God 経 root ganglion cells after purpose ラ ッ ト の training be 験 に お い て, サ イ ト カ イ ン シ グ ナ リ ン グ を タ ー ゲ ッ ト に, siRNA を Nucleofection method に よ り heritage 伝 son ノ ッ ク ダ ウ ン す る matter で ラ ッ ト root after god 経 festival culture cell に お け る cox-2, PGE2 is の such as suppressing を 観 examine す る. Youdaoplaceholder0 post-genshin segment cultured cells にsiRNAを introduction する experiment (In Vitro)[ラット post-genshin segment cultured cells <s:1> 単 in vitro] past <s:1> literature through に (Fehrenbacher JC) Et. Al. Pain, 2005), Sprague wrote - Dawleyrat (150-200 - g) Ann joy after the death of root section 経 を god after spinal marrow よ り take り し, コ ラ ゲ ナ ー ゼ を containing む Ham 'で sF12 cultures of two time cultivating す る こ と に よ り cells を 単 from し た. After PBS で incorporated model NGF を containing む poly real - D - Iysine で コ ー ト さ れ た Ham 's F12 culture で cultivate し た. [siRNA の done] nf-kappa Bp50, I kappa alpha kinase B predominate, p38MAPK, ERK を タ ー ゲ ッ ト に し た siRNA salt base with column made し た. [Nucleo fection method によるsiRNA introduction, and the inhibitory effect of び sequelae 伝 is confirmed to be <s:1>]ラット posterior root Shinto segment cultured cells を,Nucleofector In the solution, に2-5x10^6cells/100μ1に were sown with 1.5μg of siRNA を. After addition, the Amaxa siRNA nucleofection programに従 <s:1> sirna <e:1> was introduced into the を row う. After 24 hours and <s:1> 48 hours of CO2 <s:1> キュベ タ タ にて にて culture, the に cells were reproduced. The effects were を confirmed to be た た. God 経 root ganglion cells after ラ ッ ト に お け る サ イ ト カ イ ン シ グ ナ ル ノ ッ ク ダ ウ ン の unseen fruit IL1 - beta, TNF alpha に よ り ラ ッ ト root after god 経 festival culture cell を stimulus す る こ と に よ り, p38MAPK を ノ ッ ク ダ ウ ン し た group に お い て, cox-2, iNOS, SubstanceP の の inhibition of を ELISA method, etc. にて confirm that た.

项目成果

Predictors of atrial fibrillation after off-pump coronary artery bypass graft curgery.

非体外循环冠状动脉旁路移植手术后心房颤动的预测因素。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Br J Anaesth. 98
• 作者: Hosokawa K;et. al.
• 通讯作者: et. al.