RNA干渉法を用いたアグリカナーゼ-3ノックダウンによる関節炎治療開発

使用 RNA 干扰方法开发聚集蛋白聚糖酶 3 敲低关节炎治疗方法

• 批准号: 05F05502
• 负责人: 二宮 善文
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05F05502/
• 关键词: 軟骨; アグリカン; プロテアーゼ

本研究の目的は、RNA干渉法にてアグリカナーゼ-3の機能をノックダウンするなどの方法を用いて、アグリカン分解へ与える影響を検討することである。アグリカナーゼ-3は関節炎の早期の時点で発現が誘導されることが明らかとなっているが、アグリカナーゼ-3のみの阻害でアグリカン分解を抑制することが可能であれば、アグリカナーゼ-3特異的に機能を阻害する抗体が関節炎の治療に応用することが可能となる。また、最近の予備実験にて機械的刺激による関節破壊にアグリカナーゼ-3が関与している可能性が示唆されたために、あわせてストレスによる関節破壊の過程におけるアグリカナーゼ-3の発現を検討する。機械的刺激(メカニカルストレス)を細胞に負荷する実験系を構築した。0.33Hzの周期で16%または、1Hzの周期で20%細胞を伸展させる刺激を30分負荷として実施した。アグリカナーゼの発現を検討し、ADAMTS-4、5、9を含むアグリカナーゼがそれぞれ,異なる発現誘導パターンを示すことが明らかになった。(ADAMTS1;6時間で1.9倍、ADAMTS4;12時間で2.9倍、ADAMTS5;30分で1.5倍、ADAMTS9;12時間で2.7倍)またメカニカルストレス受容体に関する探索も行い、ヒトアグリカナーゼ-3のプロモーター領域(約2000塩基対)を得ることに成功した。様々な長さのプロモーター領域をPCR法で作成し、コンストラクトを作成した。これにより遺伝子発現制御に関する検討をルシフェラーゼアッセイによって実施した。OUMS-27細胞を用いたが、サイトカインによるプロモーター活性に明らかな変化を認めることができず、他細胞での検討が必要だと考えられた。

Purpose this study の は, RNA dry involved method に て ア グ リ カ ナ ー ゼ - 3 の function を ノ ッ ク ダ ウ ン す る な ど の way を with い て, ア グ リ カ へ ン decomposition and え る influence を beg す 検 る こ と で あ る. ア グ リ カ ナ ー ゼ - 3 は masato section inflammation early の の point で 発 now が induced さ れ る こ と が Ming ら か と な っ て い る が, ア グ リ カ ナ ー ゼ - 3 の み の resistance against で ア グ リ カ ン decomposition を inhibit す る こ と が may で あ れ ば, ア グ リ カ ナ ー ゼ - 3 specific に function を resistance against す る antibody が masato section phlogistic treatment の に 応 with す る こ と が may と な Youdaoplaceholder0. ま た, recently の reserve be 験 に て mechanical stimulation に よ る masato section broken 壊 に ア グ リ カ ナ ー ゼ - 3 が masato and し て い が る possibility in stopping さ れ た た め に, あ わ せ て ス ト レ ス に よ る masato section broken 壊 の process に お け る ア グ リ カ ナ ー ゼ - 3 の 発 を now beg す 検 る. Mechanical stimulation (メカニカ ストレス ストレス)を cell に load する experiment を construct た. 0.33 Hz の cycle で 16% ま た は, 1 Hz の cycle で を 20% cells extend さ せ る stimulus を 30 points load と し て be applied し た. ア グ リ カ ナ ー ゼ の 発 を now beg し 検, ADAMTS - 4, 5, 9 を containing む ア グ リ カ ナ ー ゼ が そ れ ぞ れ, different な る 発 now induced パ タ ー ン を shown す こ と が Ming ら か に な っ た. (ADAMTS1;6 time で1.9 times, ADAMTS4;12 time で2.9 times, ADAMTS5;30 minutes で1.5 times, ADAMTS9;) 12 time で 2.7 times) ま た メ カ ニ カ ル ス ト レ ス by let body に masato す る explore も い, ヒ ト ア グ リ カ ナ ー ゼ - 3 の プ ロ モ ー タ ー field (about 2000 salt) seaborne を must る こ と に successful し た. Others 々 な long さ の プ ロ モ ー タ ー field を PCR method で し, consummate コ ン ス ト ラ ク ト を made し た. こ れ に よ り posthumous son 伝 発 now suppression に masato す る beg を 検 ル シ フ ェ ラ ー ゼ ア ッ セ イ に よ っ て be applied し た. OUMS - 27 cells を using い た が, サ イ ト カ イ ン に よ る プ ロ モ ー タ ー active に Ming ら か な variations change を recognize め る こ と が で き ず, his cell で の beg が 検 necessary だ と exam え ら れ た.

项目成果

Loss of expression of type IV collagen alpha5 and alpha6 chains in colorectal cancer associated with the hypermethylat ion of their promoter region

结直肠癌中 IV 型胶原 α5 和 α6 链表达缺失与其启动子区域的高甲基化相关

• 发表时间: 2006
• 期刊: AM J Pathol 168・3
• 作者: Maehara;N.;Chijiiwa;K.;Eto;T.;Funagayama;M.;Uchiyama;S.;Nakashima;S.;Hidaka;H.;Hotokezaka;M.;Ohmuraya M;Takamori H;Motomura Y;Komori H;Masuda Y;Chikamoto A;Okuma T;Maeda K;Maeda K;Hosaka S;Hirota M;Sugita H;Hirota M;Hirota M;Hirota M;Tokunaga E;Takahashi I;Yamamoto M;Ikeda K
• 通讯作者: Ikeda K

Smooth muscle trans-membrane sarcoglycan complex in partial bladder outlet obstruction.

部分膀胱出口梗阻中的平滑肌跨膜肌聚糖复合物。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Histochem Cell Biol 126・1
• 作者: Macarak EJ et al.

mRNA expression analysis of ADAMTS-aggrecanases in head and neck cancers

头颈癌 ADAMTS-聚集蛋白聚糖酶 mRNA 表达分析

• 发表时间: 2007
• 作者: N. Matsubayashi;M. Imamura;J. Fan;I. Kojima;Lay Thi Thi;Y.Morisawa;Yasuko Kasai;Akiyoshi Sabu;C.Verdes;Fox MA;Macarak EJ et al.;Ikeda K et al.;Harvey SJ et al.;Irving-Rodgers HF et al.;Miyoshi T et al.;Demircan K;Demircan K
• 通讯作者: Demircan K

Distinct target-derived signals organize formation, maturation, and maintenance of motor nerve terminals

• DOI: 10.1016/j.cell.2007.02.035
• 发表时间: 2007-04-06
• 期刊: CELL
• 影响因子: 64.5
• 作者: Fox, Michael A.;Sanes, Joshua R.;Umemori, Hisashi
• 通讯作者: Umemori, Hisashi

Tumor-specific expression of the RGD-alpha3(IV)NC1 domain suppresses endothelial tube formation and tumor growth in mice

RGD-α3(IV)NC1 结构域的肿瘤特异性表达抑制小鼠内皮管形成和肿瘤生长

• 发表时间: 2006
• 期刊: FASEB 20 (11)
• 作者: Miyoshi;T.;et. al.
• 通讯作者: et. al.