Expression, purification and crystallization of leukotriene B4 receptor in yeast expression system

白三烯B4受体在酵母表达系统中的表达、纯化和结晶

基本信息

  • 批准号:
    19770095
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.35万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
  • 财政年份:
    2007
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2007 至 2008
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

結晶化に向けてメタノール資化酵母によるモルモット由来ロイコトリエンB_4(LTB_4)受容体(BLT1)の大量発現系構築を行った。100種類を超える変異体実験の結果、特にアミノ酸残基1-14番欠損体/Ser309リン酸化部位変異体(dN15/S309A)の^3H-LTB_4親和性は、Kd=7.6nM,Bmax=57.5pmol/mgであり、生体組織中のBLT1の親和性と同程度であった。1L培養スケールで180・gの精製サンプルを調製した。SDS-PAGEでの分子量は約40kDであるが、ゲルろ過では分子量約100kDであり、二量体で精製されていることになる。
The construction of a mass production system for crystallization of yeast derived from B_4(LTB_4) receptor (BLT1) was carried out. The results of 100 species showed that the affinity of 3H-LTB_4 with amino acid residues 1-14/Ser309 was different (dN15/S309A), Kd= 7.6nm, Bmax =57.5pmol/mg, and the affinity of BLT1 in vivo was similar. 1L culture medium 180 g refined medium SDS-PAGE: molecular weight: about 40kD; molecular weight: about 100kD; molecular weight: about 10

项目成果

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科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Membrane protein crystallography for structure-based drug design
用于基于结构的药物设计的膜蛋白晶体学
  • DOI:
  • 发表时间:
    2009
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Miyano;M.;Ago;H.;and Hori;T.
  • 通讯作者:
    T.
Crystal structure of squid rhodopsin with intracellularly extended cytoplasmic region
  • DOI:
    10.1074/jbc.c800040200
  • 发表时间:
    2008-06-27
  • 期刊:
  • 影响因子:
    4.8
  • 作者:
    Shimamura, Tatsuro;Hiraki, Kenji;Miyano, Masashi
  • 通讯作者:
    Miyano, Masashi
Leukotriene B_4 12-hydroxydehydrogenase/15-oxo-prostaglandin 13-reductase complex structure with anticonfiguration of indomethacin
白三烯B_4 12-羟基脱氢酶/15-氧代前列腺素13-还原酶复合物结构与吲哚美辛的反构型
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    asuda D;Okuno T;Yokomizo T;Hori T;Hirota N;Hashidate T;Miyano M;Shimizu T;Nakamura M.;Daisuke Yasuda;堀哲哉
  • 通讯作者:
    堀哲哉
脂質メディエータ合成酵素の構造と機能 ; 最近の進展
脂质介质合酶的结构与功能研究进展
  • DOI:
  • 发表时间:
    2008
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    吾郷日出夫;堀哲哉;宮野雅司
  • 通讯作者:
    宮野雅司
Helix 8 of leukotriene B_4 type-2 receptor is required for the folding to pass the quality control in the endoplasmic reticulum.
白三烯 B_4 2 型受体的螺旋 8 是折叠通过内质网质量控制所必需的。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2009
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Yasuda D;他8名
  • 通讯作者:
    他8名
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    Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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    2008
  • 资助金额:
    $ 2.35万
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  • 资助金额:
    $ 2.35万
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