Expression, purification and crystallization of leukotriene B4 receptor in yeast expression system

白三烯B4受体在酵母表达系统中的表达、纯化和结晶

• 批准号: 19770095
• 负责人: HORI Tetsuya
• 金额: $ 2.35万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19770095/
• 关键词: ロイコトリエンB_4; Gタンパク質共役型受容体; 酵母; 大量発現; 翻訳後修飾; 変異体; リガンド結合活性; 精製; 発現条件最適化; 可溶化; 結晶化

結晶化に向けてメタノール資化酵母によるモルモット由来ロイコトリエンB_4(LTB_4)受容体(BLT1)の大量発現系構築を行った。100種類を超える変異体実験の結果、特にアミノ酸残基1-14番欠損体/Ser309リン酸化部位変異体(dN15/S309A)の^3H-LTB_4親和性は、Kd=7.6nM,Bmax=57.5pmol/mgであり、生体組織中のBLT1の親和性と同程度であった。1L培養スケールで180・gの精製サンプルを調製した。SDS-PAGEでの分子量は約40kDであるが、ゲルろ過では分子量約100kDであり、二量体で精製されていることになる。

The construction of a mass production system for crystallization of yeast derived from B_4(LTB_4) receptor (BLT1) was carried out. The results of 100 species showed that the affinity of 3H-LTB_4 with amino acid residues 1-14/Ser309 was different (dN15/S309A), Kd= 7.6nm, Bmax =57.5pmol/mg, and the affinity of BLT1 in vivo was similar. 1L culture medium 180 g refined medium SDS-PAGE: molecular weight: about 40kD; molecular weight: about 100kD; molecular weight: about 10

项目成果

Membrane protein crystallography for structure-based drug design

用于基于结构的药物设计的膜蛋白晶体学

• 发表时间: 2009
• 期刊: Medchem News 19
• 作者: Miyano;M.;Ago;H.;and Hori;T.
• 通讯作者: T.

Crystal structure of squid rhodopsin with intracellularly extended cytoplasmic region

• DOI: 10.1074/jbc.c800040200
• 发表时间: 2008-06-27
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Shimamura, Tatsuro;Hiraki, Kenji;Miyano, Masashi
• 通讯作者: Miyano, Masashi

Leukotriene B_4 12-hydroxydehydrogenase/15-oxo-prostaglandin 13-reductase complex structure with anticonfiguration of indomethacin

白三烯B_4 12-羟基脱氢酶/15-氧代前列腺素13-还原酶复合物结构与吲哚美辛的反构型

• 发表时间: 2007
• 作者: asuda D;Okuno T;Yokomizo T;Hori T;Hirota N;Hashidate T;Miyano M;Shimizu T;Nakamura M.;Daisuke Yasuda;堀哲哉
• 通讯作者: 堀哲哉

脂質メディエータ合成酵素の構造と機能 ; 最近の進展

脂质介质合酶的结构与功能研究进展

• 发表时间: 2008
• 期刊: 分子心血管病 9
• 作者: 吾郷日出夫;堀哲哉;宮野雅司
• 通讯作者: 宮野雅司

Helix 8 of leukotriene B_4 type-2 receptor is required for the folding to pass the quality control in the endoplasmic reticulum.

白三烯 B_4 2 型受体的螺旋 8 是折叠通过内质网质量控制所必需的。

• 发表时间: 2009
• 期刊: Faseb J 23
• 作者: Yasuda D;他8名
• 通讯作者: 他8名