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マラリア原虫の病原性解析を目指した遺伝子組換え赤血球作製系の構築

构建转基因红细胞生产系统，旨在分析疟疾寄生虫的致病性

基本信息

批准号：
11J08985
负责人：
小林郷介
金额：
$ 1.02万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2013
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度までにin vitroにおいて、ヒト造血幹細胞から成熟赤血球を作製することに成功したが、分化誘導効率に問題があった。また、単球系細胞の分化が認められ、マラリア原虫の貧食が認められたため、マラリア原虫の感染実験に供するには、さらに高純度の成熟赤血球分化が求められていた。ヒトに特異的に感染する熱帯熱マラリア原虫は、マウスの赤血球に、ヒトの赤血球よりも1/5程度低い効率で「侵入」するが、その後の「発育・成熟」段階で死滅する。したがって、「侵入レセプター」の解析に焦点を絞れば、マウスの赤血球を用いることが可能である。そこで今年度は、マウスより採取した骨髄由来造血幹細胞にレンチウイルスベクターを用いて、ex vivoでマラリア原虫の受容体(glycophorin A, glycophorin B, glycophorin C, basigin, complement receptor 1など)を導入し、それを骨髄破壊ドナーマウスに移植することで、高収量、高効率の遺伝子組換えマウス赤血球を作製し、ヒトマラリア原虫の感染実験を行うことを目指した。明確に上記ヒト赤血球表面分子のみを認識し、マウスのそれを認識しないモノクローナル抗体を文献から検索し、該当するものを購入あるいは分与依頼した。該当するものが見つからなかったものに関しては、候補抗体を複数入手し検討することとした。上記遺伝子組換え実験及び、動物実験の申請し、承認を得ることができた。実験の承認を待って、遺伝子導入用のレンチウイルスベクターを入手し、glycophorin Aなどのヒト由来赤血球膜表面分子の発現ベクターを作製した。作製したものは培養細胞での発現を検討したが、いくつかの分子は発現が認められなかった。

In the past year, hematopoietic stem cells have been successfully induced into mature erythrocytes. The differentiation of erythroid cells is recognized by the presence of protozoa, and the differentiation of mature erythrocytes with high purity is required. The infection rate of the specific pathogen is 1/5 lower than that of the erythrocytes, and the infection rate is 1/5 lower than that of the erythrocytes, and the infection rate is 1/5 lower than that of the erythrocytes. The focus of the analysis of "intrusion" is on the use of red blood cells. This year, the stem cells are derived from the bone marrow, and the host cells are used ex vivo.(glycophorin A, glycophorin B, glycophorin C, basigin, complement receptor 1) is introduced into the cells and transplanted into the cells with high yield and efficiency. The infection was caused by the virus. To clarify the understanding of the molecules on the surface of erythrocytes, the identification of these molecules, the identification of these molecules, and the identification of these molecules. The candidate antibody is selected from the group consisting of two or more candidates. On the record, the child group changed its name and name, and the animal did not apply for it. In order to realize the recognition, the introduction of glycophorin A is carried out by the development of molecules on the surface of red blood cells The development of cultured cells was investigated, and molecular development was identified.