単一巨大リポソームによる開口放出様の膜融合の可視化解析

单个巨型脂质体的胞吐样膜融合的可视化分析

• 批准号: 15K07033
• 负责人: 田所 哲
• 金额: $ 3.16万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-01 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15K07033/
• 关键词: リポソーム; 開口放出; 膜融合; SNARE

マスト細胞には、炎症性メディエーターを含む分泌顆粒がある。細胞が抗原を感知すると、分泌顆粒が形質膜と融合して、内容物を細胞外に放出する（開口放出）。この開口放出の膜融合過程には、SNAREと呼ばれるタンパク質群が重要な役割を果たしている。我々は、形質膜上のSNAREタンパク質（SNAP-23/syntaxin-3）と分泌顆粒上のSNAREタンパク質（VAMP-8）を、それぞれ微小リポソームに組み込むことで、リポソーム間で膜融合が引き起こされることを明らかにした。本研究では、これらのSNAREタンパク質を巨大リポソームに組み込むことで、SNARE依存性の膜融合の可視化解析を行うことを目的とした。無細胞タンパク質合成系を利用することで 、巨大リポソームにsyntaxin-3を外向きに組み込むことに成功した。しかしながら、SNAP-23とVAMP-8に関しては合成量が少なく条件を変えても改善がみられず、リポソームに組み込むまでには至らなかった。そこで無細胞タンパク質合成系を利用した方法ではなく、Yanagisawaらが報告した精製タンパク質を用いる方法で、巨大リポソームへの再構成を試みた。その結果、SNAP-23とsyntaxin-3が組み込まれた巨大リポソームと、VAMP-8が組み込まれた巨大リポソームを作製することに成功した。今後はリポソームに組み込まれたSNAREタンパク質の配向性を決定して、SNARE依存性の膜融合の可視化解析へと進める予定であったが、研究代表者が転職により科研費応募資格を喪失することになり、研究は中途で廃止申請を行った。

The inflammatory cells are secreted. Cell antigen sensing, secretory particles, plasma membrane fusion, content release outside the cell (open release). The membrane fusion process of this open emission is opposite to that of SNARE. SNARE protein (SNAP-23/syntaxin-3) on the plasma membrane and SNARE protein (VAMP-8) on the secretory granule are mixed together. This research aims to provide a visual analysis of membrane fusion of SNARE dependencies in order to improve the quality of SNARE components. The cell-free protein synthesis system was successfully used in the synthesis of protein and protein. SNAP-23 and VAMP-8 are the key factors to improve the quality of the products. The method of cell-free mass synthesis was used to refine the mass synthesis system, and the method of reconstruction of the mass synthesis system was tried. As a result, SNAP-23 and syntaxin-3 were successfully integrated into the system, and VAMP-8 was successfully integrated into the system. In the future, the alignment of SNARE components will be determined, and the visual analysis of SNARE dependent membrane fusion will be determined. The research representative will be disqualified from the research fee. The application will be suspended in the middle of the research.

项目成果

マスト細胞のSNARE依存性の膜融合におけるcomplexin IIの役割

复合蛋白 II 在肥大细胞 SNARE 依赖性膜融合中的作用

• 发表时间: 2016
• 作者: Satoshi Tadokoro;Yoshikazu Inoh;Mamoru Nakanishi;Naohide Hirashima;伊納義和;田所哲
• 通讯作者: 田所哲

Effects of PIP2 on membrane fusion between mast cell SNARE liposomes mediated by synaptotagmin2

PIP2对突触结合蛋白2介导的肥大细胞SNARE脂质体膜融合的影响

• DOI: 10.1016/j.bbamem.2015.06.016
• 发表时间: 2015
• 期刊: Biochim. Biophys. Acta-Biomembranes
• 作者: Satoshi Tadokoro;Yoshikazu Inoh;Mamoru Nakanishi;Naohide Hirashima
• 通讯作者: Naohide Hirashima

正電荷リポソームによるマスト細胞活性化抑制機構の解明

阐明带正电荷脂质体抑制肥大细胞活化的机制

• 发表时间: 2017
• 作者: Satoshi Tadokoro;Yoshikazu Inoh;Mamoru Nakanishi;Naohide Hirashima;伊納義和
• 通讯作者: 伊納義和

マスト細胞のSNARE依存性の膜融合におけるcomplexin IIのclamp効果

复合蛋白 II 对肥大细胞 SNARE 依赖性膜融合的钳制作用

• 发表时间: 2016
• 作者: 田所哲;平嶋尚英;楯直子
• 通讯作者: 楯直子

マスト細胞におけるsyntaxin-3のリン酸化による開口放出制御機構

肥大细胞中突触蛋白 3 磷酸化对胞吐作用的调节

• 发表时间: 2015
• 作者: 田所哲;柴田哲大;天野稔朗;伊納義和;中西守;平嶋尚英;楯直子
• 通讯作者: 楯直子