低分子化合物ライブラリーを用いた骨形成過程における新規BMP2活性制御因子の探索

使用小分子化合物库寻找骨形成过程中的新型 BMP2 活性调节剂

• 批准号: 23592844
• 负责人: 藤澤 拓生
• 金额: $ 3.24万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23592844/
• 关键词: BMP-2; 低分子化合物; 骨形成; 再生医療

骨欠損部に対して骨形成タンパク(BMP)を用いて骨造を図る方法は次世代の骨造法の最も有望な方法と考えられているが,ターゲットとする細胞の応答性の低さから大量のタンパクが必要となり高コストとなること,および大量のタンパク投与による副作用のリスクが高まる危険があり,より低用量で高効果の得られる投与方法の開発が望まれている。そこで本研究はBMPの生理活性を増強する低分子化合物を同定し,その機能を解明することを目的に以下の実験を行った。まず初めに一次スクリーニングとして低分子化合物(FDA approved Drug Library)の細胞増殖能,細胞障害度ならびにBMP-2の生物学的活性に与える影響について検討した。細胞増殖能についてはMTS assayで,細胞障害度に関してはLDH assayでそれぞれ評価した。BMP-2の生物学的活性に関してはBMP-2シグナルの増強の有無をBMP-2にのみ特異的な反応を示すId-1プロモーター領域を有するレポーター遺伝子を導入したC2C12細胞を用いたルシフェラーゼアッセイで評価した。その結果,640個の低分子化合物ライブラリーから細胞に障害を与えることなくBMP-2の生物学的活性を相乗的に増強する,あるいは化合物単体でBMP-2様の生物学的活性を示す可能性のある化合物を40個抽出した。さらに二次スクリーニングとしてin vitroでアルカリホスファターゼ活性の測定とアリザリンレッド染色による石灰化能の検討を行い40個の候補化合物からBMP-2の骨形成能を増強している可能性のある化合物を7個抽出した。

The method of bone formation is the most promising method for bone formation in the next generation. The method of bone formation is the most promising method for bone formation in the next generation. The method of bone formation is the most promising method for bone formation in the next generation. Low dosage, high efficiency and high efficiency. The aim of this study is to enhance the physiological activity of BMP and to clarify its function. The effects of low molecular weight compounds (FDA approved Drug Library) on cell proliferation, cell toxicity and biological activity of BMP-2 were investigated. Cell proliferation can be controlled by MTS assay, cell impairment can be controlled by LDH assay. The biological activity of BMP-2 is related to the enhancement of BMP-2 protein and the presence or absence of BMP-2-specific protein. The protein is introduced into C2C12 cells. As a result, 640 low molecular weight compounds were found to have increased cellular toxicity and biological activity of BMP-2, and 40 compounds were found to have demonstrated the possibility of biological activity of BMP-2 as a single compound. In this study, 40 candidate compounds, BMP-2 and BMP-2, were selected from among the 40 candidate compounds, BMP-2 and BMP-2, respectively.