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F1-ATPaseの回転機構

F1-ATP酶的旋转机制

基本信息

批准号：
08F08419
负责人：
木下一彦
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Waseda University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08F08419/
关键词：
回転分子モーター F_1-ATPase SDS 界面活性剤 ATP加水分解トルク

项目摘要

昨年度に引き続き、回転分子モーターF1-ATPaseの回転子を縦に半身に削ぐ実験を行った。このモーターは、3組のαおよびβサブユニットが筒状に並んで固定子を構成し、中央にγサブユニットが片側から突き刺さって回転子となる。3つのβで順にATPが加水分解されるに伴い、γが回転する。γの固定子内に突き刺さる部分は、カルボキシル(C-)末端およびアミノ(N-)末端のαヘリクスが反平行のコイルドコイル構造をとったものである。このうちN-末ヘリクスを端から遺伝子的に削った。削除によりモーター分子全体が不安定になるのを防ぐため、γのC-末端のほうは、ペプチドリンカーによりβにつないでおいた(昨年度報告したようにリンカーは回転にほとんど影響を与えない)。N-末ヘリクスは49残基よりなるが、これをN-末から順に8, 14, 28, 40, 50残基の所まで削除した。結晶構造によると、28残基削除したところで固定子との相互作用はなくなる。これらにつきまず無負荷回転速度を40nm金粒子をプローブに用いて計測したところ、野性型の毎秒200回転からだんだん速度が落ち、28残基ないしそれ以上を削除すると約50回転で一定となった。一方、0.29μmのビーズをプローブとしてトルク(回転力)を見積もったところ、野性型の約40pN・nmに対し28残基以上を削除しても半分にしかならなかった。半身に削いだ回転子でも、半分のトルクは生み出せることになる。従来の結果と合わせると、回転子が固定子に入り込む部分ないし回転子の先端(この2箇所で固定子と相互作用)のどちらかさえ残っていれば、半分のトルクが出る。F1の同転子には、これがなければ、という重要部品はないようである。これらの結果は、現在投稿中である。

Last year, the enzyme F1-ATPase and the enzyme F2-ATPase were detected by the enzyme F1-ATPase. 3 sets of α3. β-ATP is decomposed by water, γ-ATP is decomposed by water. The γ-terminal structure of the γ-terminal is antiparallel to the α-terminal structure of the γ-terminal. This is the first time that I've ever seen a woman. Remove the whole molecule from instability, prevent it from falling, and remove the C-terminal from falling.(Last year's annual report) N-terminal deletion of residues 8, 14, 28, 40 and 50. Crystal structure, 28 residue deletion, interaction of fixator, The no-load recovery velocity of gold particles is 40nm, and the recovery velocity of wild type is 200 cycles per second. The recovery velocity of 28 residues is about 50 cycles. A square, 0.29μm, and a wild type of about 40pN·nm are removed from more than 28 residues. Half of the body is divided into two parts, half of the body is divided into two parts, half of the body is divided into two parts. The result is that the two fixed elements interact with each other, and the two fixed elements interact with each other, and the two fixed elements interact with each other. F1 is the same as the child,, important partsこれらの结果は、现在投稿中である。