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優しく動かしてみる一分子生理学

通过轻柔的运动实现单分子生理学

基本信息

批准号：
26221102
负责人：
木下一彦
金额：
$ 79.71万
依托单位：
Waseda University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (S)
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-05-30 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

電位依存性イオンチャネルであるBKカリウムチャネルは単一チャネル電流の測定が容易である。また、シェーカーチャネルは開閉が電位だけで制御されるイオンチャネルである。これらを対象に、その電位センサー部に操作用のハンドルタグを遺伝子的に導入し、電気的仕事ではなく力学的操作で開閉させることを試みている。まだ、成功率が極めて低く、タグの導入部位やハンドルの検討を試みている段階である。回転分子モーターF1-ATPaseのATP加水分解機構において、未だに決着がついていない燐酸解離とATP分解のタイミングを決めるため、加水分解しにくいATPアナログや解離が遅くなることが示唆されている燐酸アナログを用いての実験を行った。その結果、我々の仮説がこれまで通り主張できることが分かった。また、リポソームあたりに1個未満再構成したATP合成酵素について、ATP合成の逆反応としてのATP分解駆動によるプロトンポンプ活性が定量できた。これまでは、ATP分解活性のみを測定し、プロトン/ATP比を仮定してポンプ活性を推定するしかなかったが、ATP合成酵素1個あたりのプロトン/ATP比を実験的に初めて見積もることができた。70℃以上の高温で生育する超好熱菌のReverse gyraseは、高温でDNA二重鎖がほどけてしまうのを防ぐために、ATPの加水分解エネルギーを使ってDNAの二重螺旋をきつく巻き上げている。DNAの捻れ力を引っ張り力とは独立して測定することに成功し、この酵素一分子の出すトルクをはじめて見積もることができた。その結果、一回の捻れ反応にATPを2つ以上使うことが示唆され、F1-ATPaseとは違った、割といい加減な酵素であることが分かった。

The electric potential dependence is very important. It is very easy to test the current meter in the first place because of BK dependence. Please do not switch on or off the electricity level to control the operation of the electricity station. The operation of the electric power station and the electric power station plays an important role in the operation of the electric power system, and the operation of the mechanics of the electric power station. The success rate is very low, and the success rate is very low, and the success rate is very low. In response to the molecular analysis of the F1-ATPase ATP, the water decomposition mechanism, the acid dissociation mechanism, the ATP decomposition mechanism, the ATP decomposition mechanism, the water decomposition mechanism, the temperature sensor, the temperature, the temperature, the The results show that we need to make sure that we can communicate with each other in the first place. One unpurified ATP synthesis enzyme enzyme assay and ATP synthesis enzyme reverse reaction assay ATP decomposition assay activity assay. The determination of ATP decomposition activity, the presumption of ATP synthetic enzyme activity, and the ratio of ATP synthesis enzyme to ATP. High temperature (above 70 ℃), super good bacteria (Reverse gyrase), high temperature (DNA), double helix of bacteria (Reverse gyrase), high temperature (DNA), double helix (DNA), double helix (double helix) and so on. The DNA twist force leads to the independent measurement of the success, and the enzyme molecule is used to determine the success of the enzyme. According to the results of the test, more than 2 times of the ATP were twisted to make sure that the temperature was not changed, that the F1-ATPase was broken, and that the enzyme was added to the temperature.