Strukturelle Charakterisierung und Aufklärung molekularer Mechanismen von Enzymen der sulfatabhängigen Signalvermittlung

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Ziel unserer Arbeit ist die funktionelle und strukturelle Charakterisierung der humanen sulfatübertragenden Enzyme Tyrosylprotein Sulfotransferase (TPST) und PAPS-Synthetase (PAPSS) durch den Einsatz verschiedener molekular- und zellbiologischer Techniken sowie die Strukturaufklärung beider Enzyme oder einzelner Domänen mit Hilfe der multi-dimensionalen NMR. Nach Aufbau eines effizienten Expressionssystems und Reinigungsverfahrens für die genannten Proteine, soll mit der Entwicklung eines nicht radioaktiven Enzymassays für TPSTs und PAPSS und der Isotopenmarkierung (13C, 15N) der Enzyme begonnen werden. Die Quantifizierung der biochemischen und physikalischen Eigenschaften der Enzyme soll parallel zur Strukturaufklärung untersucht und der Einfluß von Substratmolekülen und Inhibitoren auf atomarer Ebene aufgeklärt werden.