移植後免疫寛容の誘導における調節T細胞の役割の解明及び心臓乾燥保存法の開発

阐明调节性 T 细胞在诱导移植后免疫耐受中的作用以及开发干心脏保存方法

基本信息

批准号：
09F09739
负责人：
梨井康
金额：
$ 1.34万
依托单位：
National Research Institute for Child Health and Development
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09F09739/
关键词：
心移植遺伝子臓器保存マイクロアレイ

项目摘要

(1)マウス同種異系心移植モデル樹立及び検討において:本年度の研究では、同種心移植後、拒絶または寛容モデルから遺伝子発現プロファイルを解析した。同種異系心移植後心臓組織、脾臓遺伝子発現のパターンは主に移植後5、8日での急性拒絶期では500数個の統計学的に有意に変化した候補遺伝子を見つけ、既存の免疫活性に関わる遺伝子の高発現が認められた。アレイデータの検証方法として多機能ジーンエクスプレッサーGeXPを試みた。GeXPはマルチフレックスRT-PCRアフローチを使い、25遺伝子の発現定量解析を1反応で同時に測定することがてき、その発現をさらに定量RT-PCRにて確認を行い、アレイでの結果の相関性の確認が出来た。今後GeXP法による移植後拒絶・寛容を予測できるバイオマーカーの発見、患者に対する免疫抑制療法の軽減や休止の指標として期待したい。(2)心臓乾燥保存法の開発において:今年度の研究では、グラフト心臓のCOとO2の混合ガスによる48時間保存後の移植後30、60、100日後と経時的に病理組織、グラフト重量、グラフト生存率を比較検討した。移植直後の蘇生率は100%(6/6)、うち60日後でも生着していた割合は、83%(5/6)であった。しかし、グラフト心臓の組織HE切片を検討したところ、部分的には優位に保たれていたが、浸潤細胞が多数存在し、心筋の壊死、繊維化している所見が得られた。保存時間を24時間で移植蘇生させたところ、グラフト心臓は、保存なしで直ちに移植したグラフト心臓(コントロール群)と、組織・生存率を比較しても相違なく優位に保たれていた。一方、アレイの解析では、発現解析ソフトを用い、発現データの二次元クラスター網羅的遺伝子発現解析を行い、COガス保存特異的な候補遺伝子を100数十個見つけた。うちコントロール群と比較し、遺伝子発現増強(2倍以上)が107個で、発現減弱の遺伝子が50個であった。

（1）在小鼠同种异体心脏移植模型的建立和研究中：在今年的研究中，在同种异体心脏移植后的排斥或耐受模型中分析了基因表达谱。植入后5至8天的急性排斥期在急性排斥周期中发现心脏组织和脾脏基因表达的模式，并且观察到与免疫活性相关的现有基因的高表达。我们已经尝试将多功能基因表达Gexp作为验证数组数据的一种方法。 Gexp可以使用多弹性RT-PCR Aflowchi同时测量一个反应中25个基因的定量表达分析，并通过定量RT-PCR进一步证实了其表达，从而证实了阵列中结果的相关性。我们希望GEAX方法将帮助您发现可以预测移植后排斥和耐受性的生物标志物，以及减少和暂停患者免疫抑制治疗的指标。（2）在开发干燥的心脏存储方法中：今年的研究比较了随着时间的推移的病理组织，移植物的重量和移植物存活率，在与CO和O2混合气体混合的移植心中储存48小时后。移植后立即复苏率为100％（6/6），其中实时率为83％（5/6）。但是，当检查组织的组织部分时，检查了嫁接心脏的部分，尽管它们是部分主导的，但仍有许多浸润性细胞，导致心肌坏死和纤维化。当将移植的心脏在24小时内复苏时，与接枝心脏（对照组）的组织和存活率相比，移植的心脏保持不变，这些（对照组）立即植入而没有存储。另一方面，在阵列分析中，我们使用表达分析软件进行了二维表达数据簇的全面基因表达分析，并发现了特定于CO气体储存的100多个候选基因。与对照组相比，观察到107个基因表达增加（超过2倍），观察到50个基因减弱表达。