iPS細胞を用いた制御性樹状細胞への分化誘導および免疫細胞療法の開発に関する研究

利用iPS细胞诱导分化为调节性树突状细胞的研究及免疫细胞疗法的开发

• 批准号: 21659310
• 负责人: 梨井 康
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: National Research Institute for Child Health and Development
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659310/
• 关键词: 移植・再生医療; 遺伝子; 細胞・組織

昨年度の成果を踏まえ、今年度ではより詳細にiPS細胞から樹状細胞(DC)への分化誘導過程中各ステップの細胞において解析を行った。マウスiPS細胞をOP9細胞と共培養し、OP9上で最初のステップにおいて、造血幹細胞に発現するCD309、CD34が確認でき、この時点では樹状細胞の表面分子は発現していないことがわかった。これらの細胞を新たに用意したOP9細胞上に播種し、GM-CSFを添加して、樹状細胞への分化誘導を行い、造血幹細胞の表面分子は消え、骨髄由来樹状細胞(BM-DC)と同様、CD11c、MHCクラスII、共刺激分子のCD80、CD86発現していることが分かり、ギムザ染色による細胞形態の確認もその差が見られなかった。また、この未成熟状態が7～10日が保たれ、BM-DC(2～3日)より遥かに長く維持することが出来、様々なサイトカインの添加するによって、DCの成熟・活性化、或は御製性DCへの分化誘導が出来ると期待したい。さらに、抗原提示能として、T細胞に対する刺激を混合リンパ球培養(MLR)にて調べたところ、これもBM-DCと同様にiPS細胞由来DCの数にT細胞増殖が比例していた。これらの結果からiPS細胞からDCに分化誘導できたことが示唆された。一方、iPS細胞由来のDCを医療に用いる際、非ヒト動物等に由来未同定成分を含まない培養液を用い、かつ、マウス由来のフィーダー細胞を用いない分化誘導法の開発が必須であるため、OP9細胞の代わりにBMP-4等サイトカインを用いて、iPS細胞からDCへの分化誘導を試みた。OP9上での培養と同様、各ステップにおいて、造血幹細胞或はDCに発現する表面分子の確認を行った。今後、未成熟DC、制御性DCの分化誘導及びその機能解析を引き続き行う予定である。さらに、今年度では、B6マウスからBDF1マウスへのリンパ球輸入による急性GvHDモデルも確立でき、免疫細胞療法の実施へと繋げていきたいと考えている。

Yesterday annual の results を tread ま え, our で は よ り detailed に iPS cells か ら dendritic cells (DC) へ の induction process each ス テ ッ プ の cells に お い analytical line を っ て た. マ ウ ス iPS cells を OP9 と trained し, OP9 で initially の ス テ ッ プ に お い て, hematopoietic stem cells に 発 now す る CD309, CD34 が confirm で き, こ の point で は dendritic cells の surface molecular は 発 now し て い な い こ と が わ か っ た. こ れ ら の cells を new た に intention し た OP9 に on cell seeding し, gm-csf を add し て, dendritic cells へ の induction line を い, hematopoietic stem cell surface molecular は の え origin dendritic cells, bone marrow (BM - DC) と with others, CD11c, MHC ク ラ, ス II の CD80, CD86 発 now し て い る The <s:1> とが was divided into and ギムザ staining of による cell morphology <s:1> to confirm that the <s:1> そ <s:1> <s:1> differs in が as shown in られな られな った った. ま た, こ の immature state が 7 ~ 10 が bartender た れ, BM - DC (2 ~ 3) よ り remote か に long く maintain す る こ と が come out, others 々 な サ イ ト カ イ ン の add す る に よ っ て, mature DC の, activeness, or は drive makes DC へ の induction が out る と expect し た い. さ ら に, antigen can prompt と し て, T cell に す seaborne る stimulus を mixed リ ン パ ball training (MLR) provision に て adjustable べ た と こ ろ, こ れ も BM - DC と with others に iPS cell origin number of DC の に T cells raised colonization が proportion し て い た. <s:1> れら <s:1> results ら らiPS cells に らDCに differentiation induction で た た とが とが とが prompts された. Party, iPS cell origin の DC を medical に with い る interstate, non ヒ ト animals not be に origin such as composition contains を ま な を use い い broth, か つ, マ ウ ス origin の フ ィ ー ダ ー cells を using い な い differentiation candidated の open 発 が must で あ る た め, OP9 cell の わ り に BMP - 4 サ イ ト カ イ ン を with い て, iPS cells か ら DCへ <s:1> differentiation-induced を try みた. On OP9, で <s:1> cultures of と identical, each ステップにお ステップにお て て, hematopoietic stem cells or <s:1> DCに showed する surface molecules <e:1> confirming を rows った. In the future, the differentiation induction of immature DC and dominant DC and the analysis of びそ <s:1> functional analysis を is based on 続 続 続 続 う to determine である. さ ら に, our で は and B6 マ ウ ス か ら BDF1 マ ウ ス へ の リ ン パ ball input に よ る acute GvHD モ デ ル も establish で き, immune cell therapy の be applied へ と 繋 げ て い き た い と exam え て い る.

项目成果

PD-1/B7-H1 interaction contribute to the spontaneous acceptance of mouse liver allograft.

• DOI: 10.1111/j.1600-6143.2009.02859.x
• 发表时间: 2010-01
• 期刊: American journal of transplantation : official journal of the American Society of Transplantation and the American Society of Transplant Surgeons
• 作者: Morita M;Fujino M;Jiang G;Kitazawa Y;Xie L;Azuma M;Yagita H;Nagao S;Sugioka A;Kurosawa Y;Takahara S;Fung J;Qian S;Lu L;Li XK
• 通讯作者: Li XK

Bone marrow mesenchymal stem cells suppress lymphocyte proliferation and prevent rat graft-versus-host disease but cloned MSCs are failed

骨髓间充质干细胞抑制淋巴细胞增殖并预防大鼠移植物抗宿主病，但克隆的间充质干细胞失败

• 发表时间: 2009
• 作者: Kitazawa Y;ら
• 通讯作者: ら

Prevention of Graft-Versus-Host Diseases by In Vivo supCD28mAb-Expanded Antigen-Specific nTreg Cells

• DOI: 10.3727/096368910x508870
• 发表时间: 2010-01-01
• 期刊: CELL TRANSPLANTATION
• 影响因子: 3.3
• 作者: Kitazawa，Yusuke;Li，Xiao-Kang;Takahara，Shiro
• 通讯作者: Takahara，Shiro

Induction of Donor-Specific Tolerance Using Superagonistic CD28 Antibody in Rat Renal Allografts: Regulatory T-Cell Expansion Before Engraftment May Be Important

• DOI: 10.1097/tp.0b013e3182007b59
• 发表时间: 2010-12-27
• 期刊: TRANSPLANTATION
• 影响因子: 6.2
• 作者: Azuma, Haruhito;Isaka, Yoshitaka;Takahara, Shiro
• 通讯作者: Takahara, Shiro

The effects of Foxp3-expressing regulatory T cells expanded with CD28 superagonist antibody in DSS-induced mice colitis

• DOI: 10.1016/j.intimp.2010.11.034
• 发表时间: 2011-05-01
• 期刊: INTERNATIONAL IMMUNOPHARMACOLOGY
• 影响因子: 5.6
• 作者: Chen, Jiajie;Xie, Lin;Zhong, Liang
• 通讯作者: Zhong, Liang